| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 小菜蛾的发生及危害 | 第11页 |
| 1.2 小菜蛾的抗药性现状 | 第11页 |
| 1.3 昆虫对杀虫剂的代谢抗性 | 第11-14页 |
| 1.3.1 细胞色素P450介导的昆虫对杀虫剂的初级代谢 | 第12页 |
| 1.3.2 调控P450基因过量表达的分子机制 | 第12-13页 |
| 1.3.3 UGTs介导的昆虫对杀虫剂的次级代谢 | 第13-14页 |
| 1.4 昆虫对杀虫剂的靶标抗性 | 第14-15页 |
| 1.5 miRNA对基因表达的调控 | 第15页 |
| 1.6 双酰胺类杀虫剂的抗药性概况 | 第15-17页 |
| 1.6.1 昆虫对双酰胺类杀虫药剂的抗性现状 | 第16页 |
| 1.6.2 小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的代谢抗性 | 第16-17页 |
| 1.6.3 小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的靶标抗性 | 第17页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二章 小菜蛾对氯虫苯甲酰胺抗性的生化机制研究 | 第19-27页 |
| 2.1 材料和方法 | 第19-23页 |
| 2.1.1 化学试剂 | 第19页 |
| 2.1.2 供试虫源及饲养 | 第19-20页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第20页 |
| 2.1.4 生物测定 | 第20页 |
| 2.1.5 7-乙氧基香豆素O-脱乙基酶(ECOD)活性测定 | 第20-21页 |
| 2.1.6 羧酸酯酶活性测定 | 第21页 |
| 2.1.7 谷胱甘肽S-转移酶活性测定 | 第21页 |
| 2.1.8 小菜蛾P450基因的相对表达量测定 | 第21-23页 |
| 2.1.9 数据分析 | 第23页 |
| 2.2 实验结果 | 第23-26页 |
| 2.2.1 不同种群小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的抗性水平 | 第23-24页 |
| 2.2.2 不同种群小菜蛾的解毒酶活性 | 第24页 |
| 2.2.3 不同种群小菜蛾P450基因的相对表达量 | 第24-25页 |
| 2.2.4 不同种群小菜蛾CYP6BG1的相对表达量 | 第25-26页 |
| 2.3 讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 利用RNAi研究CYP6BG1在小菜蛾对氯虫苯甲酰胺抗性中的作用 | 第27-32页 |
| 3.1 材料和方法 | 第27-29页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第27页 |
| 3.1.2 供试小菜蛾及饲养方法 | 第27页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第27页 |
| 3.1.4 含T7启动子的模板DNA制备 | 第27-28页 |
| 3.1.5 dsRNA的制备 | 第28-29页 |
| 3.1.6 用RNAi沉默CYP6BG1 | 第29页 |
| 3.1.7 数据分析 | 第29页 |
| 3.2 实验结果 | 第29-31页 |
| 3.2.1 注射dsRNA对小菜蛾CYP6BG1的干扰效果 | 第29-30页 |
| 3.2.2 注射dsRNA对小菜蛾P450酶活性影响 | 第30页 |
| 3.2.3 干扰CYP6BG1后小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的敏感度变化 | 第30-31页 |
| 3.3 讨论 | 第31-32页 |
| 第四章 利用转基因果蝇研究CYP6BG1在小菜蛾对氯虫苯甲酰胺抗性中的作用 | 第32-39页 |
| 4.1 材料与方法 | 第32-35页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第32页 |
| 4.1.2 果蝇饲养方法 | 第32页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第32页 |
| 4.1.4 构建CYP6BG1转基因果蝇质粒 | 第32-34页 |
| 4.1.5 转CYP6BG1基因果蝇品系的建立 | 第34-35页 |
| 4.1.6 转基因果蝇中CYP6BG1基因的鉴定 | 第35页 |
| 4.1.7 杀虫剂对不同品系果蝇的生物测定 | 第35页 |
| 4.2 实验结果 | 第35-37页 |
| 4.2.1 CYP6BG1基因在转基因果蝇中的鉴定 | 第35-36页 |
| 4.2.2 不同果蝇品系CYP6BG1的相对表达量 | 第36页 |
| 4.2.3 不同果蝇品系对杀虫剂的敏感性 | 第36-37页 |
| 4.3 讨论 | 第37-39页 |
| 第五章 CYP6BG1在sf9中的表达及其对氯虫苯甲酰胺的代谢活性 | 第39-47页 |
| 5.1 材料与方法 | 第39-43页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第39页 |
| 5.1.2 供试小菜蛾及饲养方法 | 第39页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第39页 |
| 5.1.4 构建昆虫蛋白表达载体 | 第39-41页 |
| 5.1.5 杆状病毒质粒转染Sf9细胞 | 第41-42页 |
| 5.1.6 扩增病毒 | 第42页 |
| 5.1.7 目的蛋白的表达 | 第42页 |
| 5.1.8 CYP6BG1表达产物酶活性测定 | 第42页 |
| 5.1.9 CYP6BG1蛋白对氯虫苯甲酰胺的代谢 | 第42-43页 |
| 5.2 实验结果 | 第43-46页 |
| 5.2.1 小菜蛾CYP6BG1和CPR重组载体的鉴定 | 第43-44页 |
| 5.2.2 表达的小菜蛾CYP6BG1蛋白活性 | 第44页 |
| 5.2.3 CYP6BG1蛋白降低了氯虫苯甲酰胺对细胞的毒性 | 第44-45页 |
| 5.2.4 CYP6BG1蛋白可降低氯虫苯甲酰胺对小菜蛾的毒性 | 第45-46页 |
| 5.3 讨论 | 第46-47页 |
| 第六章 CYP6BG1基因在转录水平上的表达调控机制 | 第47-62页 |
| 6.1 材料和方法 | 第47-54页 |
| 6.1.1 主要试剂 | 第47页 |
| 6.1.2 供试小菜蛾及饲养方法 | 第47-48页 |
| 6.1.3 主要仪器 | 第48页 |
| 6.1.4 染色体步移法克隆启动子 | 第48-49页 |
| 6.1.5 构建启动子报告基因载体 | 第49-52页 |
| 6.1.6 启动子活性检测 | 第52页 |
| 6.1.7 氯虫苯甲酰胺对启动子活性的影响 | 第52-53页 |
| 6.1.8 调控CYP6BG1转录因子的预测和功能验证 | 第53页 |
| 6.1.9 启动子区域序列多样性分析 | 第53页 |
| 6.1.10 不同种群CYP6BG1启动子活性比较 | 第53-54页 |
| 6.2 实验结果 | 第54-60页 |
| 6.2.1 CYP6BG1的5'上游侧翼序列特征 | 第54页 |
| 6.2.2 不同片段的启动子活性 | 第54-55页 |
| 6.2.3 氯虫苯甲酰胺等杀虫剂对启动子的诱导活性 | 第55-58页 |
| 6.2.4 FTZ-F1及CYP6BG1的相对表达量 | 第58-59页 |
| 6.2.5 FTZ-F1基因沉默对CYP6BG1表达量的影响 | 第59页 |
| 6.2.6 不同种群CYP6BG1基因启动子活性差异 | 第59-60页 |
| 6.3 讨论 | 第60-62页 |
| 第七章 UGT33AA4过量表达参与小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的抗性 | 第62-72页 |
| 7.1 材料和方法 | 第62-65页 |
| 7.1.1 主要试剂 | 第62页 |
| 7.1.2 供试小菜蛾及饲养方法 | 第62-63页 |
| 7.1.3 主要仪器 | 第63页 |
| 7.1.4 增效剂实验 | 第63页 |
| 7.1.5 小菜蛾UGTs基因在不同种群中的表达量检测 | 第63-64页 |
| 7.1.6 苯巴比妥对UGT33AA4基因的影响 | 第64页 |
| 7.1.7 UGT33AA4基因在不同组织中的表达量检测 | 第64页 |
| 7.1.8 UGT33AA4基因沉默及对氯虫苯甲酰胺敏感性的影响 | 第64-65页 |
| 7.2 实验结果 | 第65-70页 |
| 7.2.1 5-硝基尿嘧啶和磺吡酮增强了氯虫苯甲酰胺对小菜蛾的毒性 | 第65-66页 |
| 7.2.2 小菜蛾敏感和抗性种群中差异表达的UGTs基因 | 第66页 |
| 7.2.3 PHB和氯虫苯甲酰胺对UGT33AA4的诱导作用 | 第66-68页 |
| 7.2.4 UGT33AA4在不同组织中的表达水平 | 第68页 |
| 7.2.5 抑制UGT33AA4表达提高了氯虫苯甲酰胺对小菜蛾的毒力 | 第68-70页 |
| 7.3 讨论 | 第70-72页 |
| 第八章 miRNA参与调控小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的抗性 | 第72-82页 |
| 8.1 材料和方法 | 第73-76页 |
| 8.1.1 化学试剂 | 第73页 |
| 8.1.2 供试虫源及细胞系 | 第73页 |
| 8.1.3 实验仪器 | 第73页 |
| 8.1.4 Dicer-1的RNA干扰 | 第73页 |
| 8.1.5 qPCR检测Dicer-1和PxRyR的相对表达量 | 第73-74页 |
| 8.1.6 调控小菜蛾PxRyR基因的miRNA预测及其表达量检测 | 第74页 |
| 8.1.7 双萤光素酶法验证miRNAs与靶基因的结合 | 第74-75页 |
| 8.1.8 体内miR-7a和miR-8519含量变化对小菜蛾对药剂敏感性的影响 | 第75-76页 |
| 8.2 实验结果 | 第76-81页 |
| 8.2.1 沉默Dicer-1后导致PxRyR的表达量上升 | 第76页 |
| 8.2.2 调控PxRyR的miRNA预测 | 第76-77页 |
| 8.2.3 双萤光素酶法检测证明预测的两个miRNAs可与PxRyR的3'-UTR结合 | 第77-78页 |
| 8.2.4 不同种群中miR-7a、miR-8519及PxRyR的相对表达量 | 第78-79页 |
| 8.2.5 过表达miR-7a和miR-8519可抑制PxRyR的表达 | 第79页 |
| 8.2.6 抑制miR-7a和miR-8519表达可上调PxRyR的表达 | 第79-80页 |
| 8.2.7 过量表达miR-7a和miR-8519可增加小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的敏感性 | 第80页 |
| 8.2.8 抑制miR-7a和miR-8519表达降低了小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的敏感性 | 第80-81页 |
| 8.3 讨论 | 第81-82页 |
| 全文总结 | 第82-83页 |
| 1 结论 | 第82页 |
| 2 本研究创新之处 | 第82页 |
| 3 问题与展望 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 作者简介 | 第98-99页 |
