| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 谷胱甘肽过氧化物酶家族 | 第10-15页 |
| 1.2 p53 及其功能介绍 | 第15-19页 |
| 1.3 本课题研究意义 | 第19-20页 |
| 第二章 GPX2 通过与 p53 相互作用调控其稳定性 | 第20-44页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-28页 |
| 2.1.1 质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 细胞 | 第20页 |
| 2.1.3 常用试剂及试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第21-22页 |
| 2.1.5 一般细胞培养条件 | 第22页 |
| 2.1.6 细胞总蛋白提取 | 第22页 |
| 2.1.7 Western Blot | 第22-23页 |
| 2.1.8 Co-IP | 第23-24页 |
| 2.1.9 GST-pull down | 第24-25页 |
| 2.1.10 细胞共定位 | 第25页 |
| 2.1.11 荧光素酶报告基因检测 | 第25-26页 |
| 2.1.12 细胞总 RNA 提取 | 第26页 |
| 2.1.13 RT-PCR | 第26-27页 |
| 2.1.14 Real-time RCR | 第27页 |
| 2.1.15 蛋白稳定性 | 第27页 |
| 2.1.16 泛素化实验 | 第27页 |
| 2.1.17 细胞周期检测 | 第27-28页 |
| 2.1.18 统计学分析 | 第28页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第28-43页 |
| 2.2.1 GPX2 在肿瘤细胞系中的表达 | 第28页 |
| 2.2.2 GPX2 与 p53 的相互作用 | 第28-30页 |
| 2.2.3 GPX2 与 p53 在细胞核存在共定位 | 第30-31页 |
| 2.2.4 GPX2 与 p53 相互作用结构域的确定 | 第31-32页 |
| 2.2.5 GPX2 对 p53 及其下游靶基因转录活性的影响 | 第32-34页 |
| 2.2.6 过表达 GPX2 下调 p53 下游靶基因的表达水平 | 第34-36页 |
| 2.2.7 敲低 GPX2 上调 p53 下游靶基因表达水平 | 第36-38页 |
| 2.2.8 过表达 GPX2 对 p53 半衰期的影响 | 第38-39页 |
| 2.2.9 干涉 GPX2 对 p53 蛋白半衰期的影响 | 第39-40页 |
| 2.2.10 GPX2 对 p53 泛素化水平影响 | 第40-41页 |
| 2.2.11 GPX2 以 p53 依赖的方式调控细胞周期 | 第41-43页 |
| 2.3 小结 | 第43-44页 |
| 第三章 GPX2 慢病毒系统的构建及其细胞效应 | 第44-59页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-49页 |
| 3.1.1 细胞与菌株 | 第44页 |
| 3.1.2 常用试剂及试剂盒 | 第44-45页 |
| 3.1.3 主要溶液配制 | 第45页 |
| 3.1.4 GPX2 慢病毒过表达载体的构建 | 第45-47页 |
| 3.1.4.1 扩增目的片段 | 第45页 |
| 3.1.4.2 目的片段回收 | 第45-46页 |
| 3.1.4.3 双酶切 | 第46页 |
| 3.1.4.4 双酶切产物回收 | 第46页 |
| 3.1.4.5 连接 | 第46页 |
| 3.1.4.6 转化 | 第46页 |
| 3.1.4.7 菌落 PCR | 第46-47页 |
| 3.1.4.8 双酶切鉴定 | 第47页 |
| 3.1.4.9 质粒提取 | 第47页 |
| 3.1.5 GPX2 慢病毒干涉载体的构建 | 第47页 |
| 3.1.6 慢病毒包装 | 第47-48页 |
| 3.1.7 流式细胞术测病毒滴度 | 第48页 |
| 3.1.8 慢病毒感染效果检测 | 第48页 |
| 3.1.9 流式细胞术和 Western blot 检测 | 第48-49页 |
| 3.1.10 统计学分析 | 第49页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第49-58页 |
| 3.2.1 GPX2 慢病毒过表达载体的构建和包装 | 第49-52页 |
| 3.2.2 GPX2 慢病毒干涉载体的构建和包装 | 第52-58页 |
| 3.2.2.1 GPX2 干涉载体的构建和鉴定 | 第52-53页 |
| 3.2.2.2 慢病毒包装、纯化、浓缩及滴度测定 | 第53-54页 |
| 3.2.2.3 干涉慢病毒 pSicoR-GPX2 的表达鉴定 | 第54-56页 |
| 3.2.2.4 敲低 GPX2 的表达对 HepG2 细胞凋亡的影响 | 第56-58页 |
| 3.3 小结 | 第58-59页 |
| 第四章 结论和展望 | 第59-60页 |
| 4.1 结论 | 第59页 |
| 4.2 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
