| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 英文缩写词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-20页 |
| 1.1 嗜铬粒蛋白A | 第13-16页 |
| 1.1.1 嗜铬粒蛋白A的发现 | 第13页 |
| 1.1.2 嗜铬粒蛋白A | 第13-14页 |
| 1.1.3 嗜铬粒蛋白A的生物学功能 | 第14-16页 |
| 1.2 单克隆抗体技术 | 第16-17页 |
| 1.2.1 单克隆抗体技术的发展 | 第16-17页 |
| 1.2.2 单克隆抗体的应用 | 第17页 |
| 1.3 免疫组织化学 | 第17-18页 |
| 1.3.1 免疫组织化学的概况 | 第17-18页 |
| 1.3.2 免疫组织化学的应用 | 第18页 |
| 1.4 本课题的研究目的及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 嗜铬粒蛋白A免疫原的制备 | 第20-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 合成引物 | 第20页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-26页 |
| 2.2.1 抗原基因序列的密码子优化 | 第21页 |
| 2.2.2 优化序列的验证 | 第21页 |
| 2.2.3 pET28a-CgA表达载体的构建 | 第21-24页 |
| 2.2.4 诱导CgA菌株小样表达 | 第24页 |
| 2.2.5 CgA蛋白的表达与纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.6 蛋白浓度测定 | 第25页 |
| 2.2.7 Western blot验证目的蛋白 | 第25-26页 |
| 2.3 实验结果 | 第26-32页 |
| 2.3.1 抗原基因序列的选择与及密码子优化 | 第26-27页 |
| 2.3.2 优化序列的分析 | 第27-28页 |
| 2.3.3 pET28a-CgA表达载体的构建 | 第28-30页 |
| 2.3.4 目的蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.5 蛋白浓度的测定 | 第31-32页 |
| 2.4 实验讨论 | 第32-33页 |
| 2.4.1 目的基因的优化 | 第32页 |
| 2.4.2 目的蛋白的选择与鉴定 | 第32-33页 |
| 2.5 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 分泌嗜铬粒蛋白A单克隆抗体杂交瘤细胞株的获得 | 第34-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第34-35页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-39页 |
| 3.2.1 小鼠免疫 | 第35页 |
| 3.2.2 小鼠血清效价测定 | 第35-36页 |
| 3.2.3 鼠骨髓瘤细胞的复苏及增殖 | 第36-37页 |
| 3.2.4 细胞融合 | 第37-38页 |
| 3.2.5 杂交瘤细胞的获得 | 第38-39页 |
| 3.2.6 试剂盒检测单克隆抗体的亚型 | 第39页 |
| 3.3 实验结果 | 第39-44页 |
| 3.3.1 小鼠血清效价的测定 | 第39-40页 |
| 3.3.2 融合前细胞的培养和观察 | 第40-41页 |
| 3.3.3 融合后细胞的培养与观察 | 第41页 |
| 3.3.4 杂交瘤细胞的筛选结果 | 第41-42页 |
| 3.3.5 细胞克隆化培养 | 第42-43页 |
| 3.3.6 单克隆抗体亚类鉴定 | 第43页 |
| 3.3.7 杂交瘤细胞染色体结果分析 | 第43-44页 |
| 3.4 实验讨论 | 第44-45页 |
| 3.4.1 单克隆抗体技术 | 第44页 |
| 3.4.2 佐剂的选择 | 第44-45页 |
| 3.4.3 细胞融合 | 第45页 |
| 3.4.4 杂交瘤细胞株的筛选 | 第45页 |
| 3.5 小结 | 第45-47页 |
| 第四章 嗜铬粒蛋白A单克隆抗体的性质鉴定与应用 | 第47-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第47页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第47页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第47-48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-52页 |
| 4.2.1 小鼠体内制备抗体 | 第48页 |
| 4.2.2 单克隆抗体的纯化 | 第48-49页 |
| 4.2.3 4E5抗体特异性检测 | 第49页 |
| 4.2.4 4E5单克隆抗体的识别肽段 | 第49-50页 |
| 4.2.5 CgA抗体纯化后的效价检测 | 第50页 |
| 4.2.6 抗体亲和力的测定 | 第50-51页 |
| 4.2.7 CgA抗体在免疫组化中的应用 | 第51页 |
| 4.2.8 抗体在免疫组化中稳定性的测定 | 第51-52页 |
| 4.3 实验结果 | 第52-58页 |
| 4.3.1 单克隆抗体的纯化结果及浓度测定 | 第52页 |
| 4.3.2 4E5抗体特异性的检测 | 第52-53页 |
| 4.3.3 4E5抗体识别表位的初步确定 | 第53-55页 |
| 4.3.4 抗体的效价测定 | 第55页 |
| 4.3.5 抗体的亲和力测定 | 第55-56页 |
| 4.3.6 4E5抗体在IHC中的应用 | 第56-57页 |
| 4.3.7 4E5抗体稳定性的测定 | 第57-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-59页 |
| 4.4.1 单克隆抗体的制备 | 第58页 |
| 4.4.2 抗体的纯化 | 第58-59页 |
| 4.4.3 4E5抗体识别表位的确定 | 第59页 |
| 4.4.4 抗体性质分析 | 第59页 |
| 4.4.5 4E5抗体在免疫组化上的应用 | 第59页 |
| 4.5 小结 | 第59-61页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第61-63页 |
| 5.1 全文总结 | 第61-62页 |
| 5.2 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 攻读学位期间的学术论文与研究成果 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |