| 中文摘要 | 第3-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 缩略词表 | 第12-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-47页 |
| 1 精原干细胞的研究进展 | 第18-24页 |
| 1.1 精原干细胞的来源 | 第18页 |
| 1.2 精原干细胞的形态学特征 | 第18-19页 |
| 1.3 精原干细胞的鉴定 | 第19-20页 |
| 1.4 精原干细胞形成的调控机制 | 第20-24页 |
| 1.4.1 调控SSCs形成的关键转录因子 | 第20-21页 |
| 1.4.2 调控SSCs形成的关键基因 | 第21-22页 |
| 1.4.3 调控SSCs形成的关键信号通路 | 第22-24页 |
| 2 表观遗传学与组蛋白甲基化研究进展 | 第24-30页 |
| 2.1 表观遗传学 | 第24-25页 |
| 2.1.1 组蛋白修饰 | 第24页 |
| 2.1.2 染色质重塑 | 第24-25页 |
| 2.1.3 其他调控机制 | 第25页 |
| 2.2 组蛋白甲基化修饰 | 第25-28页 |
| 2.2.1 组蛋白甲基化及去甲基化 | 第25-26页 |
| 2.2.2 组蛋白H3K4甲基化酶 | 第26页 |
| 2.2.3 MLL1和MLL2 | 第26-27页 |
| 2.2.4 MLL3和MLL4 | 第27页 |
| 2.2.5 SET1A和SET1B | 第27-28页 |
| 2.2.6 ASHlL | 第28页 |
| 2.3 组蛋白H3K4去甲基化酶 | 第28-30页 |
| 2.3.1 LSD1和LSD2 | 第28-29页 |
| 2.3.2 JARID1家族 | 第29-30页 |
| 2.4 组蛋白甲基化发挥功能的方式 | 第30页 |
| 3 生殖细胞发生过程中的组蛋白甲基化修饰研究进展 | 第30-32页 |
| 3.1 原始生殖细胞发生与组蛋白甲基化修饰 | 第30-31页 |
| 3.2 精子发生与组蛋白甲基化修饰 | 第31-32页 |
| 3.3 卵子发生与组蛋白甲基化修饰 | 第32页 |
| 4 研究目的与意义 | 第32-33页 |
| 5 参考文献 | 第33-47页 |
| 第二章 组蛋白甲基化修饰酶和H3K4me2在鸡不同组织和细胞中时序表达及定位研究 | 第47-60页 |
| 1 材料与方法 | 第48-54页 |
| 1.1 实验材料 | 第48页 |
| 1.2 实验试剂 | 第48-50页 |
| 1.3 鸡不同组织器官及不同类型细胞的收集 | 第50页 |
| 1.4 RT-qPCR检测组蛋白甲基化修饰酶的时序性表达 | 第50-52页 |
| 1.4.1 RNA的提取与定量 | 第50页 |
| 1.4.2 cDNA第一链的合成 | 第50-51页 |
| 1.4.3 实时定量PCR | 第51-52页 |
| 1.5 Western Blot检测H3K4me2时序性表达 | 第52-53页 |
| 1.5.1 蛋白质的提取及定量 | 第52页 |
| 1.5.2 Western blot | 第52-53页 |
| 1.6 细胞免疫荧光检测H3K4me2在鸡SSCs中的定位分析 | 第53-54页 |
| 1.6.1 鸡SSCs的分离与培养 | 第53页 |
| 1.6.2 细胞化学免疫荧光 | 第53-54页 |
| 1.7 数据分析 | 第54页 |
| 2 实验结果 | 第54-57页 |
| 2.1 组蛋白甲基化修饰酶在鸡不同细胞和器官组织中的表达检测 | 第54-56页 |
| 2.2 组蛋白H3K4me2在鸡不同细胞和器官组织中的表达水平检测 | 第56-57页 |
| 2.3 组蛋白H3K4me2在鸡精原干细胞中的定位 | 第57页 |
| 3 讨论 | 第57-58页 |
| 4 小结 | 第58页 |
| 5 参考文献 | 第58-60页 |
| 第三章 鸡SSCs形成过程中组蛋白H3K4me2甲基化修饰酶的筛选 | 第60-72页 |
| 1 材料与方法 | 第60-64页 |
| 1.1 实验材料与试剂 | 第60-61页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第60-61页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第61页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第61页 |
| 1.3 实验方法 | 第61-64页 |
| 1.3.1 设计及合成shRNA靶序列 | 第61-63页 |
| 1.3.2 慢病毒重组质粒的构建 | 第63页 |
| 1.3.3 慢病毒干扰载体干扰活性检测 | 第63-64页 |
| 1.3.4 Western Blot | 第64页 |
| 1.4 数据分析 | 第64页 |
| 2 实验结果 | 第64-68页 |
| 2.1 靶向组蛋白甲基化修饰酶慢病毒干扰载体的构建及鉴定 | 第64-65页 |
| 2.2 组蛋白甲基化修饰酶慢病毒干扰载体干扰效率检测 | 第65-68页 |
| 2.3 筛选调控组蛋白H3K4me2的组蛋白甲基化修饰酶 | 第68页 |
| 3 讨论 | 第68-69页 |
| 4 小结 | 第69页 |
| 5 参考文献 | 第69-72页 |
| 第四章 组蛋白H3K4me2甲基化在鸡SSCs形成过程的作用研究 | 第72-97页 |
| 1 材料与方法 | 第72-79页 |
| 1.1 实验材料与试剂 | 第72-73页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第73页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第73页 |
| 1.4 ESCs的分离培养 | 第73-74页 |
| 1.5 SSCs的分离培养 | 第74页 |
| 1.6 体外诱导检测 | 第74-77页 |
| 1.6.1 鸡ESCs体外诱导分化试验 | 第74页 |
| 1.6.2 BCIP/NBT碱性磷酸酯酶染色 | 第74-75页 |
| 1.6.3 Edu检测ESCs增殖能力 | 第75页 |
| 1.6.4 RT-qPCR检测相关基因表达 | 第75-76页 |
| 1.6.5 细胞化学免疫荧光检测F | 第76页 |
| 1.6.6 流式细胞分析 | 第76-77页 |
| 1.6.7 Western blot | 第77页 |
| 1.7 体内鸡胚慢病毒注射 | 第77-79页 |
| 1.7.1 慢病毒整合鸡胚基因组检测 | 第78页 |
| 1.7.2 实时荧光定量PCR检测相关基因表达 | 第78页 |
| 1.7.3 流式细胞分析检测各组SSCs比例 | 第78-79页 |
| 1.8 统计分析 | 第79页 |
| 2 实验结果 | 第79-93页 |
| 2.1 体外研究H3K4me2在SSCs形成过程中的作用 | 第79-89页 |
| 2.1.1 稳定表达shRNA-LSD1和shRNA-MLL2的鸡ESCs构建及鉴定 | 第79-80页 |
| 2.1.2 组蛋白H3K4me2对鸡ESCs自我更新的作用 | 第80-81页 |
| 2.1.3 组蛋白H3K4me2对鸡ES细胞增殖能力的作用 | 第81-82页 |
| 2.1.4 细胞形态变化观察 | 第82-84页 |
| 2.1.5 体外SSCs形成效率检测 | 第84-89页 |
| 2.2 体内鸡胚慢病毒注射 | 第89-93页 |
| 2.2.1 慢病毒干扰载体在鸡胚中的整合情况检测 | 第90-91页 |
| 2.2.2 体内SSCs生成效率检测 | 第91-93页 |
| 3 讨论 | 第93-94页 |
| 4 结论 | 第94-95页 |
| 5 参考文献 | 第95-97页 |
| 第五章 组蛋白H3K4me2甲基化调控鸡精SSCs形成的表观机制研究 | 第97-117页 |
| 1 材料与方法 | 第97-102页 |
| 1.1 实验材料与试剂 | 第97-98页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第98页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第98页 |
| 1.4 鸡精原干细胞的分离培养 | 第98页 |
| 1.5 慢病毒干扰载体感染鸡精原干细胞 | 第98页 |
| 1.6 慢病毒干扰载体干扰效率检测 | 第98-99页 |
| 1.7 病毒感染精原干细胞的芯片分析 | 第99页 |
| 1.8 H3K4me2抗体的CHIP-qPCR实验 | 第99-102页 |
| 1.8.1 CHIP实验 | 第99-102页 |
| 1.8.2 RT-qPCR验证RNA-seq数据 | 第102页 |
| 1.8.3 CHIP数据的分析 | 第102页 |
| 2 实验结果 | 第102-113页 |
| 2.1 SSCs形态及鉴定 | 第102-103页 |
| 2.2 慢病毒干扰载体感染鸡精原干细胞 | 第103-104页 |
| 2.3 转录组测序分析结果概况 | 第104-107页 |
| 2.3.1 RNA提取和检测及质量检测 | 第104-105页 |
| 2.3.2 基因表达水平分布 | 第105-106页 |
| 2.3.3 相关性分析 | 第106-107页 |
| 2.4 差异基因分析 | 第107-109页 |
| 2.4.1 差异基因聚类 | 第107页 |
| 2.4.2 差异基因的筛选分析 | 第107-108页 |
| 2.4.3 差异基因GO注释分析 | 第108-109页 |
| 2.5 MLL2和LSD1下游基因筛选分析 | 第109-112页 |
| 2.5.1 组间差异基因韦恩分析 | 第109-110页 |
| 2.5.2 组间差异基因GO富集分析 | 第110-111页 |
| 2.5.3 差异基因pathway分析 | 第111-112页 |
| 2.5.4 MLL2和LSD1下游基因的鉴定 | 第112页 |
| 2.6 MLL2和LSD1下游基因启动子H3K4me2水平检测 | 第112-113页 |
| 3 讨论 | 第113-115页 |
| 4 结论 | 第115页 |
| 5 参考文献 | 第115-117页 |
| 全文结论与创新 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 研究生期间发表的论文 | 第119-120页 |
