| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略符号说明 | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 喹诺酮类抗生素简介 | 第14-15页 |
| 1.2 喹诺酮类药物的作用机制 | 第15页 |
| 1.3 细菌对喹诺酮类的耐药机制 | 第15-17页 |
| 1.3.1 目标介导的喹诺酮类耐药 | 第15-16页 |
| 1.3.2 染色体介导的喹诺酮类耐药 | 第16页 |
| 1.3.3 质粒介导的喹诺酮耐药 | 第16-17页 |
| 1.4 整合子与基因盒系统 | 第17-18页 |
| 1.5 实时荧光定量PCR技术 | 第18-20页 |
| 1.5.1 荧光定量PCR的原理 | 第18-19页 |
| 1.5.2 荧光试剂 | 第19-20页 |
| 1.5.3 RT-PCR的数据分析方法 | 第20页 |
| 1.6 水环境微生物群落多样性分析 | 第20-22页 |
| 1.6.1 环境微生物多样性的分析方法 | 第21-22页 |
| 1.7 立题依据与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 水环境中总基因组的采集及qnrA基因的定量分析 | 第24-44页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.2.1 水样采集 | 第24-25页 |
| 2.2.2 实验试剂与溶液配方 | 第25-26页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.3.1 样品处理 | 第27页 |
| 2.3.2 水样总DNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.3.3 总DNA提取质量的检测 | 第28-29页 |
| 2.3.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第29-33页 |
| 2.3.6 标准曲线绘制 | 第33页 |
| 2.3.7 RT-PCR实验定量qnrA基因及16SrRNA基因 | 第33-35页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第35-43页 |
| 2.4.1 总DNA质量检测 | 第35-36页 |
| 2.4.2 质粒标准品的制备 | 第36页 |
| 2.4.3 标准曲线的制备 | 第36-37页 |
| 2.4.4 熔解曲线分析 | 第37-38页 |
| 2.4.5 实验的灵敏度 | 第38页 |
| 2.4.6 RT-PCR对qnrA基因和16SrRNA基因的绝对定量 | 第38-43页 |
| 2.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 废水环境中耐药细菌的筛选及质粒介导的喹诺酮抗性基因的检测 | 第44-56页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 实验材料 | 第44-46页 |
| 3.2.1 实验试剂与溶液配方 | 第44-45页 |
| 3.2.2 培养基成分 | 第45页 |
| 3.2.3 抗生素及配制(浓度参考肠杆菌科菌抑菌环直径和MIC解释标准) | 第45-46页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-50页 |
| 3.3.1 耐药菌株筛选与保存 | 第46-47页 |
| 3.3.2 CTAB法提取细菌总基因组 | 第47-48页 |
| 3.3.3 基因组提取质量的检测 | 第48页 |
| 3.3.4 质粒介导的喹诺酮抗性基因的检测 | 第48-49页 |
| 3.3.5 废水环境中耐药细菌分离株中1,2,3型整合子的检测 | 第49-50页 |
| 3.3.6 废水环境中耐药细菌分离株中含有1,2,3型整合子的基因盒阵列检测 | 第50页 |
| 3.3.7 基因盒酶切分型 | 第50页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第50-54页 |
| 3.4.1 水样采集时间、地点及相关耐药细菌的筛选 | 第50-51页 |
| 3.4.2 五种质粒介导的喹诺酮抗性基因的检测结果 | 第51-52页 |
| 3.4.3 PCR检测耐药菌株中的整合子类型 | 第52-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 第四章 水环境微生物群落多样性分析 | 第56-67页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验材料 | 第56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-58页 |
| 4.3.1 样品DNA的准备及质量检测 | 第56-57页 |
| 4.3.2 荧光定量与Miseq测序 | 第57-58页 |
| 4.3.3 序列分析 | 第58页 |
| 4.3.4 多样性和群落结构分析 | 第58页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第58-66页 |
| 4.4.1 样品DNA的准备及质量检测 | 第58-59页 |
| 4.4.2 测序结果 | 第59-60页 |
| 4.4.3 菌群多样性分析 | 第60-62页 |
| 4.4.4 群落结构分析 | 第62-66页 |
| 4.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 第五章 全文总结 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第77页 |
