| 符号说明 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| 1.1 猪圆环病毒病简介 | 第13-18页 |
| 1.1.1 病原学特性 | 第13-16页 |
| 1.1.1.1 病原分类 | 第13-14页 |
| 1.1.1.2 理化特性 | 第14页 |
| 1.1.1.3 基因型 | 第14页 |
| 1.1.1.4 病毒基因组结构和功能 | 第14-16页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第16-18页 |
| 1.1.2.1 传染源 | 第16-17页 |
| 1.1.2.2 传播途径 | 第17页 |
| 1.1.2.3 感染机制 | 第17-18页 |
| 1.2 PCV2 疫苗研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2.1 弱毒苗 | 第18-19页 |
| 1.2.2 灭活疫苗 | 第19页 |
| 1.2.3 亚单位疫苗 | 第19-20页 |
| 1.2.4 活载体疫苗 | 第20页 |
| 1.2.5 核酸疫苗 | 第20页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 2 我国部分省市 PCV2 的分子流行病学研究 | 第22-33页 |
| 2.1 材料 | 第22页 |
| 2.1.1 病料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌种、质粒 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂、试剂盒 | 第22页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 病料的处理 | 第22页 |
| 2.2.2 引物的设计 | 第22-23页 |
| 2.2.3 模板的制备 | 第23页 |
| 2.2.4 PCV2 样品的 PCR 扩增 | 第23页 |
| 2.2.5 PCV2 全基因的扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.6 PCR 产物回收 | 第24-25页 |
| 2.2.7 连接 | 第25页 |
| 2.2.8 转化 | 第25-26页 |
| 2.2.8.1 感受态细胞的制备 ( CaCl_2 法) | 第25页 |
| 2.2.8.2 转化 | 第25-26页 |
| 2.2.9 阳性重组质粒的筛选及鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.9.1 重组质粒的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.9.2 阳性重组质粒的鉴定 | 第27页 |
| 2.2.10 PCV2 分子遗传和变异分析 | 第27页 |
| 2.3 结果 | 第27-32页 |
| 2.3.1 PCV2 Cap 基因 PCR 扩增结果 | 第27-28页 |
| 2.3.2 PCV2 的感染和流行状况分析 | 第28页 |
| 2.3.3 PCV2 全基因组的扩增结果 | 第28-29页 |
| 2.3.4 PCV2 全基因组的分子遗传和变异分析 | 第29-32页 |
| 2.4 讨论和分析 | 第32-33页 |
| 3 pcDNA4/HisMax-Cap 真核表达质粒的构建和免疫效力的研究 | 第33-40页 |
| 3.1 材料 | 第33页 |
| 3.1.1 毒种、质粒、实验动物 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂、试剂盒 | 第33页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第33页 |
| 3.2 方法 | 第33-36页 |
| 3.2.1 目的基因（PCV2 ORF2）的扩增 | 第33-34页 |
| 3.2.2 PCR 产物的回收 | 第34页 |
| 3.2.3 PCR 产物与 pMD18-T 载体的连接和转化 | 第34-35页 |
| 3.2.4 pMD-Cap 和 pcDNA4/HisMax 的双酶切 | 第35页 |
| 3.2.5 Cap 基因与 pcDNA4/HisMax 的连接 | 第35页 |
| 3.2.6 pcDNA4.0-Cap 重组质粒在动物体内免疫效力的测定 | 第35-36页 |
| 3.2.6.1 重组质粒的制备 | 第35-36页 |
| 3.2.6.2 重组质粒免疫小鼠 | 第36页 |
| 3.2.6.3 被免小鼠血清中 PCV2 抗体检测 | 第36页 |
| 3.3 结果 | 第36-38页 |
| 3.3.1 猪圆环病毒 Cap 基因 PCR 扩增结果 | 第36-37页 |
| 3.3.2 PCV2 阳性重组质粒的筛选及鉴定 | 第37页 |
| 3.3.3 pMD-Cap 和 pcDNA4/HisMax 的双酶切 | 第37页 |
| 3.3.4 Cap 基因与载体 pcDNA4/HisMax 的连接 | 第37-38页 |
| 3.3.5 动物试验结果 | 第38页 |
| 3.4 讨论和分析 | 第38-40页 |
| 4 PCV2-cap-腺病毒载体构建 | 第40-47页 |
| 4.1 材料 | 第40页 |
| 4.1.1 细胞、质粒 | 第40页 |
| 4.1.2 主要试剂、试剂盒 | 第40页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第40页 |
| 4.2 方法 | 第40-44页 |
| 4.2.1 目的基因（PCV2-Cap）的扩增 | 第40-41页 |
| 4.2.2 PCR 产物的回收 | 第41页 |
| 4.2.3 PCR 产物和空载体质粒 pacAd5CMVK-NpA Shuttle vector 的双酶切 | 第41页 |
| 4.2.4 Cap 基因与 pacAd5CMVK-NpA Shuttle vector 的连接 | 第41-42页 |
| 4.2.5 pShuttle-Cap 与腺病毒骨架载体的线性化 | 第42页 |
| 4.2.6 pShuttle-Cap 与腺病毒骨架载体的共转染 | 第42-43页 |
| 4.2.7 重组病毒的收获 | 第43页 |
| 4.2.8 重组病毒的纯化 | 第43页 |
| 4.2.9 重组病毒 TCID_50 测定 | 第43-44页 |
| 4.3 结果 | 第44-46页 |
| 4.3.1 猪圆环病毒 Cap 基因 PCR 扩增结果 | 第44页 |
| 4.3.2 Cap 基因和空载体质粒腺病毒穿梭载体的双酶切 | 第44页 |
| 4.3.3 猪圆环病毒 Cap 基因-腺病毒穿梭载体重组质粒的筛选及鉴定 | 第44-45页 |
| 4.3.4 pShuttle-Cap 与腺病毒骨架载体的共转染 | 第45-46页 |
| 4.4 讨论和分析 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 附录 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
