| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 结核病简介 | 第12-14页 |
| 1.1.1 结核病与结核分枝杆菌 | 第12页 |
| 1.1.2 结核病的现状 | 第12-14页 |
| 1.2 结核分枝杆菌 | 第14-18页 |
| 1.2.1 结核分枝杆菌特点 | 第14-15页 |
| 1.2.2 结核杆菌感染过程 | 第15-16页 |
| 1.2.3 结核分枝杆菌的毒力因子 | 第16-18页 |
| 1.2.3.1 Ag85B | 第16-17页 |
| 1.2.3.2 TB10.4 | 第17-18页 |
| 1.3 结核疫苗现状 | 第18-20页 |
| 1.4 tPA 信号肽 | 第20页 |
| 1.5 本研究的设计思路 | 第20-21页 |
| 第2章 重组质粒构建与真核表达 | 第21-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.2 质粒与酶 | 第21页 |
| 2.1.3 试剂与溶液配制 | 第21-23页 |
| 2.1.3.1 菌种培养及保存相关溶液 | 第21-22页 |
| 2.1.3.2 抗生素溶液 | 第22页 |
| 2.1.3.3 琼脂糖凝胶电泳溶液 | 第22页 |
| 2.1.3.4 SDS-PAGE 凝胶电泳所用试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3.5 Western-Blot 试剂 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 序列设计 | 第23-25页 |
| 2.2.2 PCR 扩增目的片段 | 第25-26页 |
| 2.2.3 重组 p-GEM-T-easy 克隆载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.4 重组 pcDNA3.1(-)与 pSC11M1 质粒构建 | 第27页 |
| 2.2.5 真核表达重组pcDNA3.1(-)质粒 | 第27-28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-31页 |
| 2.3.1 PCR 扩增目的片段结果 | 第28页 |
| 2.3.2 重组 p-GEM-T-easy 克隆质粒结果 | 第28-29页 |
| 2.3.3 重组 pcDNA3.1(-)与 pSC11M1 质粒结果 | 第29-30页 |
| 2.3.4 真核表达 Western-Blot 结果 | 第30-31页 |
| 2.4 本章小结 | 第31-33页 |
| 第3章 重组 MVA 载体疫苗的制备 | 第33-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第33页 |
| 3.1.2 试剂 | 第33页 |
| 3.1.3 细胞系与病毒株 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 3.2.1 MVA 重组 | 第34页 |
| 3.2.2 重组 MVA 的筛选 | 第34-35页 |
| 3.2.3 重组 MVA 的检测 | 第35-36页 |
| 3.2.3.1 PCR 检测 | 第35-36页 |
| 3.2.3.2 Western-Blot 检测 | 第36页 |
| 3.2.4 重组 MVA 的扩增 | 第36-37页 |
| 3.2.5 重组 MVA 的纯化 | 第37页 |
| 3.2.6 重组 MVA 滴度的测定 | 第37-38页 |
| 3.3 实验结果 | 第38-41页 |
| 3.3.1 MVA 重组检测 | 第38页 |
| 3.3.2 重组 MVA 的筛选检测结果 | 第38-40页 |
| 3.3.3 重组 MVA 蛋白表达量检测 | 第40页 |
| 3.3.4 MVA 病毒滴度检测 | 第40-41页 |
| 3.4 本章小结 | 第41-42页 |
| 第4章 重组 MVA 病毒的免疫原性研究 | 第42-53页 |
| 4.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第42页 |
| 4.1.2 仪器试剂 | 第42-43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-47页 |
| 4.2.1 动物免疫方案 | 第43页 |
| 4.2.2 脾淋巴细胞分离 | 第43-44页 |
| 4.2.3 T 细胞亚群分群 | 第44-45页 |
| 4.2.4 T-cell 增殖及细胞因子检测 | 第45页 |
| 4.2.5 ELISPOT 检测刺激后脾细胞 IFN-γ的分泌 | 第45-46页 |
| 4.2.6 CTL 体外细胞杀伤实验 | 第46-47页 |
| 4.3 实验结果 | 第47-52页 |
| 4.3.1 CTL 体外杀伤实验结果 | 第47-48页 |
| 4.3.2 ELISPOT 检测 IFN-γ的分泌 | 第48-50页 |
| 4.3.3 FCM 检测 T 细胞亚群分布 | 第50-52页 |
| 4.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第5章 结论 | 第53-55页 |
| 5.1 讨论 | 第53-54页 |
| 5.2 结论 | 第54页 |
| 5.3 展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
