| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 中华蜜蜂的生物学特性及重要地位 | 第13-14页 |
| 1.2 中华蜜蜂相关功能基因的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 蜂王浆蛋白相关基因 | 第14-15页 |
| 1.2.2 化学通讯相关蛋白基因 | 第15页 |
| 1.2.3 抗逆相关基因 | 第15-16页 |
| 1.3 STIP1的研究进展 | 第16-23页 |
| 1.3.1 STIP1的发现 | 第16-17页 |
| 1.3.2 STIP1的序列分析 | 第17页 |
| 1.3.3 STIP1的生物学功能 | 第17-23页 |
| 1.3.3.1 Hsp70与Hsp90的连接体分子 | 第17-18页 |
| 1.3.3.2 STIP1与癌症 | 第18-19页 |
| 1.3.3.3 STIP1与朊病毒 | 第19-20页 |
| 1.3.3.4 STIP1在小鼠睾丸中的表达 | 第20页 |
| 1.3.3.5 STIP1与支架蛋白 | 第20页 |
| 1.3.3.6 STIP1与衰老和应激反应 | 第20-23页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 动物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第24页 |
| 2.1.3 酶与各种生化试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-42页 |
| 2.2.1 动物材料的饲养及处理 | 第26-27页 |
| 2.2.2 中华蜜蜂总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3 反转录cDNA第一条链的合成 | 第28页 |
| 2.2.4 AccSTIP1基因开放阅读框的获取 | 第28-29页 |
| 2.2.5 目的片段的回收、连接与转化 | 第29-31页 |
| 2.2.5.1 目的片段的回收 | 第29-30页 |
| 2.2.5.2 目的片段与克隆载体的连接 | 第30页 |
| 2.2.5.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.5.4 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第31页 |
| 2.2.6 大肠杆菌质粒DNA的提取与酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.6.1 大肠杆菌质粒DNA的提取(试剂盒微量法) | 第31-32页 |
| 2.2.6.2 大肠杆菌质粒DNA的酶切鉴定 | 第32页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR检测基因的表达水平 | 第32-34页 |
| 2.2.7.1 内参引物、反应体系与反应程序的确定 | 第32-33页 |
| 2.2.7.2 实时荧光定量PCR分析 | 第33页 |
| 2.2.7.3 数据处理 | 第33-34页 |
| 2.2.8 AccSTIP1原核表达载体的构建及表达 | 第34-36页 |
| 2.2.8.1 原核表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.8.2 原核表达的诱导 | 第35页 |
| 2.2.8.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第35-36页 |
| 2.2.9 抗体的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.10 Westernblot分析 | 第37页 |
| 2.2.11 重组蛋白的纯化及抗氧化功能分析 | 第37-39页 |
| 2.2.11.1 重组蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| 2.2.11.2 纸片扩散分析 | 第38页 |
| 2.2.11.3 混合功能氧化系统分析 | 第38-39页 |
| 2.2.12 双链RNA(dsRNA)的合成及干扰AccSTIP | 第39-40页 |
| 2.2.12.1 双链RNA(dsRNA)模板的制备 | 第39页 |
| 2.2.12.2 双链RNA(dsRNA)的合成 | 第39-40页 |
| 2.2.12.3 注射dsAccSTIP1干扰基因AccSTIP | 第40页 |
| 2.2.13 检测RNA干扰的效果 | 第40页 |
| 2.2.14 AccSTIP1基因沉默后检测其它抗氧化相关标记基因的表达水平 | 第40页 |
| 2.2.15 网络资源和生物学软件 | 第40-42页 |
| 2.2.15.1 网络资源 | 第40-41页 |
| 2.2.15.2 生物学软件 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-56页 |
| 3.1 中华蜜蜂AccSTIP1基因的分离及序列分析 | 第42-45页 |
| 3.1.1 中华蜜蜂 Acc STIP1 基因的分离 | 第42页 |
| 3.1.2 中华蜜蜂 Acc STIP1 基因的序列分析 | 第42-45页 |
| 3.2 中华蜜蜂AccSTIP1基因的表达特性分析 | 第45-49页 |
| 3.2.1 中华蜜蜂AccSTIP1基因在不同发育时期与不同组织部位中的表达特性分析 | 第45-46页 |
| 3.2.2 中华蜜蜂AccSTIP1基因在不同非生物胁迫中的表达特性分析 | 第46-49页 |
| 3.3 重组AccSTIP1蛋白的原核表达与Westernblot分析 | 第49-51页 |
| 3.3.1 重组AccSTIP1蛋白的原核表达 | 第49-50页 |
| 3.3.2 Westernblot分析 | 第50-51页 |
| 3.4 重组AccSTIP1蛋白在氧化应激中的保护效应 | 第51-54页 |
| 3.4.1 纸片扩散法分析重组AccSTIP1蛋白功能 | 第51-52页 |
| 3.4.2 混合功能氧化系统分析重组AccSTIP1蛋白功能 | 第52-54页 |
| 3.5 RNAi介导的中华蜜蜂AccSTIP1基因沉默 | 第54-56页 |
| 3.5.1 中华蜜蜂AccSTIP1基因沉默的确定 | 第54页 |
| 3.5.2 AccSTIP1基因沉默对中华蜜蜂的影响 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-60页 |
| 4.1 AccSTIP1基因的序列分析 | 第56页 |
| 4.2 AccSTIP1基因的表达特性分析 | 第56-58页 |
| 4.3 重组AccSTIP1蛋白的功能分析 | 第58页 |
| 4.4 RNAi介导的中华蜜蜂AccSTIP1基因沉默 | 第58-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第71页 |
