| 摘要 | 第7-11页 |
| Abstract | 第11-16页 |
| 缩略词表 | 第17-19页 |
| 前言 | 第19-23页 |
| 第一章 AKT/c-Met共表达促进肝细胞癌的快速形成研究 | 第23-42页 |
| 1 实验材料 | 第26-27页 |
| 1.1 实验动物 | 第26页 |
| 1.2 实验试剂 | 第26页 |
| 1.3 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-33页 |
| 2.1 质粒提取及鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2 注射质粒溶液的配制 | 第28页 |
| 2.3 高压尾静脉转染法 | 第28页 |
| 2.4 实验分组 | 第28页 |
| 2.5 小鼠肿瘤大体形态检测 | 第28-29页 |
| 2.6 苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosinstaining,HE) | 第29页 |
| 2.7 免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)染色 | 第29-30页 |
| 2.8 组织中RNA提取和即时聚合酶链式反应(Quantitative Real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测 | 第30-32页 |
| 2.9 溶液配制 | 第32页 |
| 2.10 统计学方法 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-38页 |
| 3.1 同时共转染AKT和c-Met诱导小鼠肝脏肿瘤的快速形成 | 第33-34页 |
| 3.2 AKT/c-Met诱导小鼠肿瘤形成是由于转染AKT和c-Met引起 | 第34-35页 |
| 3.3 AKT和c-Met诱导的肝脏肿瘤组织学形态为肝细胞癌 | 第35-37页 |
| 3.4 AKT/c-Met诱导小鼠肿瘤的分子生物学特征为肝癌 | 第37-38页 |
| 4 小结与讨论 | 第38-42页 |
| 第二章 AKT/c-Met共表达促进肝细胞癌形成的分子机制研究 | 第42-60页 |
| 1 实验材料 | 第44-47页 |
| 1.1 实验动物 | 第44页 |
| 1.2 细胞系 | 第44-45页 |
| 1.3 体外实验用药物 | 第45页 |
| 1.4 主要试剂及耗材 | 第45页 |
| 1.5 抗体 | 第45-46页 |
| 1.6 主要仪器 | 第46-47页 |
| 2 实验方法 | 第47-49页 |
| 2.0 质粒提取及鉴定 | 第47页 |
| 2.1 shRNA的构建 | 第47页 |
| 2.2 注射质粒溶液的配制 | 第47页 |
| 2.3 高压尾静脉转染法 | 第47页 |
| 2.4 动物实验分组 | 第47-48页 |
| 2.5 细胞培养 | 第48页 |
| 2.6 细胞药物干预实验 | 第48页 |
| 2.7 细胞增殖实验 | 第48页 |
| 2.8 细胞凋亡实验 | 第48页 |
| 2.9 组织/细胞蛋白的提取和Westernbloting | 第48-49页 |
| 3 实验结果 | 第49-58页 |
| 3.1 AKT/c-Met共表达促进AKT/mTOR和Ras/MAPK信号通路的激活 | 第49-50页 |
| 3.2 沉默Raptor基因可抑制AKT/c-Met共表达诱导的小鼠HCC形成 | 第50-52页 |
| 3.3 敲除FASN基因可抑制AKT/c-Met共表达诱导的小鼠肝癌形成 | 第52-56页 |
| 3.5 联合抑制AKT和c-Met不利于人源肝癌细胞生长 | 第56-58页 |
| 4 小结与讨论 | 第58-60页 |
| 第三章 AKT、c-Met和FASN在人体HCC中共表达研究 | 第60-66页 |
| 1 实验材料 | 第60-61页 |
| 1.1 主要试剂及耗材 | 第60页 |
| 1.2 抗体 | 第60页 |
| 1.3 实验仪器 | 第60页 |
| 1.4 人体HCC病理标本 | 第60-61页 |
| 2 实验方法 | 第61-62页 |
| 3 实验结果 | 第62-64页 |
| 4 小结与讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 雷公藤红素抗AKT/c-Met诱导的HCC作用及机制研究 | 第66-78页 |
| 1 实验材料 | 第67-69页 |
| 1.1 实验动物 | 第67页 |
| 1.2 体外实验用药物 | 第67页 |
| 1.3 主要试剂及耗材 | 第67-68页 |
| 1.4 抗体 | 第68页 |
| 1.5 主要仪器 | 第68页 |
| 1.6 给药溶液的配制 | 第68-69页 |
| 2 实验方法 | 第69-70页 |
| 2.1 质粒提取及鉴定 | 第69页 |
| 2.2 注射质粒溶液配制 | 第69页 |
| 2.3 高压尾静脉转染法 | 第69页 |
| 2.4 动物实验分组 | 第69页 |
| 2.5 苏木精-伊红(HE)染色 | 第69页 |
| 2.6 免疫组织化学(IHC)染色 | 第69页 |
| 2.7 组织中RNA提取和即时聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测 | 第69页 |
| 2.8 组织蛋白的提取和Westernbloting | 第69-70页 |
| 2.9 统计学方法 | 第70页 |
| 3 实验结果 | 第70-75页 |
| 3.1 Celastrol有效的抑制AKT/c-Met诱导小鼠HCC的肿瘤生长 | 第70-71页 |
| 3.2 Celastrol减轻AKT/c-Met诱导小鼠HCC肝脏病理学变化 | 第71-72页 |
| 3.3 Celastrol降低AKT/c-Met诱导小鼠HCC肝脏和血清中肝癌标志物的表达水平 | 第72-73页 |
| 3.4 Sorafenib对AKT/c-Met诱导的小鼠HCC无效 | 第73-74页 |
| 3.5 Celastrol下调AKT/c-Met诱导小鼠HCC肝脏中Ki67和PCNA的表达水平 | 第74页 |
| 3.6 Celastrol抑制AKT/c-Met诱导小鼠HCC肝脏中AKT/mTOR和Ras/MAPK相关蛋白的表达水平 | 第74-75页 |
| 4 小结与讨论 | 第75-78页 |
| 第五章 雷公藤红素长循环脂质体的制备、表征及细胞学行为初步研究 | 第78-98页 |
| 1 实验材料 | 第78-79页 |
| 1.1 药品及试剂 | 第78-79页 |
| 1.2 主要仪器 | 第79页 |
| 2 实验方法 | 第79-85页 |
| 2.1 雷公藤红素体外分析方法的建立 | 第79-80页 |
| 2.2 脂质体包封率的测定 | 第80-81页 |
| 2.3 雷公藤红素脂质体(Celastrol/L)的制备 | 第81-82页 |
| 2.4 雷公藤红素长循环脂质体(Celastrol/PEG-L)的制备及表征 | 第82-83页 |
| 2.5 Celastrol/PEG-L贮存稳定性考察 | 第83页 |
| 2.6 Celastrol/PEG-L冻干工艺的考察 | 第83页 |
| 2.7 体外释放行为研究 | 第83页 |
| 2.8 细胞摄取动力学 | 第83-84页 |
| 2.9 雷公藤红素及脂质体细胞毒作用 | 第84-85页 |
| 3 实验结果 | 第85-95页 |
| 3.1 雷公藤红素体外分析方法的建立 | 第85-87页 |
| 3.2 过膜法测定脂质体包封率的验证 | 第87页 |
| 3.3 雷公藤红素脂质体(Celastrol/L)的制备 | 第87-89页 |
| 3.4 雷公藤红素长循环脂质体(Celastrol/PEG-L)的制备及表征 | 第89-91页 |
| 3.5 Celastrol/PEG-L贮存稳定性考察 | 第91页 |
| 3.6 Celastrol/PEG-L冻干工艺的考察 | 第91-92页 |
| 3.7 雷公藤红素普通脂质体和长循环脂质体体外释放 | 第92-93页 |
| 3.8 细胞摄取动力学 | 第93-94页 |
| 3.9 细胞毒作用 | 第94-95页 |
| 4 小结与讨论 | 第95-98页 |
| 结语 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-110页 |
| 附录1 肝细胞癌的研究进展 | 第110-129页 |
| 附录2 攻博期间获得的科研成果 | 第129-132页 |
| 致谢 | 第132页 |
