| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-24页 |
| 1 植物抗旱的研究概况 | 第14-18页 |
| 1.1 蔗糖转运蛋白的发现 | 第15-16页 |
| 1.2 SUT基因的定位及表达蛋白的空间构象 | 第16-17页 |
| 1.3 SUT基因克隆及同源性分析 | 第17-18页 |
| 1.4 SUT基因功能研究进展 | 第18页 |
| 2 转基因技术 | 第18-24页 |
| 2.1 转基因技术的概念和原理 | 第19页 |
| 2.2 转基因技术与传统育种 | 第19-20页 |
| 2.3 转基因技术的具体方法 | 第20-22页 |
| 2.3.1 农杆菌介导转化法 | 第20-21页 |
| 2.3.2 基因枪介导转化法 | 第21-22页 |
| 2.3.3 花粉管通道法 | 第22页 |
| 2.4 转基因技术在农作物方面的应用 | 第22-23页 |
| 2.4.1 抗虫 | 第22页 |
| 2.4.2 抗除草剂及抗病毒 | 第22-23页 |
| 2.4.3 抗细菌和真菌 | 第23页 |
| 2.4.4 改善植物品质 | 第23页 |
| 2.5 主要问题和措施 | 第23-24页 |
| 第二部分 研究报告 | 第24-59页 |
| 第一章 TaSUT1基因的克隆及亚细胞定位 | 第24-47页 |
| 一、实验材料及实验仪器 | 第24-25页 |
| 1 植物材料和质粒 | 第24页 |
| 2 试剂和培养基 | 第24-25页 |
| 3 实验仪器 | 第25页 |
| 二、实验方法 | 第25-35页 |
| 1 实验材料的获得 | 第25-26页 |
| 2 Trizol法小麦幼苗总RNA提取 | 第26-27页 |
| 3 RT-PCR引物设计 | 第27页 |
| 4 两步法RT-PCR克隆TaSUT1基因 | 第27页 |
| 5 RT-PCR产物的胶回收(天根公司) | 第27-28页 |
| 6 回收产物磷酸化(加A) | 第28页 |
| 7 将TaSUT1基因经磷酸化后连接到pMD19-T-simple Vector | 第28页 |
| 8 CaCl_2法制备细菌感受态 | 第28-29页 |
| 9 将连接体系转化到DH5α感受态细胞中 | 第29页 |
| 10 转化子的菌体PCR验证(ML3+引物和TaSUT1下游引物) | 第29页 |
| 11 TaSUT1-T重组质粒的提取 | 第29-31页 |
| 12 提取质粒的酶切验证 | 第31页 |
| 13 TaSUT1基因亚细胞定位 | 第31-35页 |
| 三、结果分析 | 第35-45页 |
| 1 获得小麦幼苗 | 第35-36页 |
| 2 小麦组织总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 3 TaSUT1基因的RT-PCR扩增 | 第37页 |
| 4 TaSUT1磷酸化后连接至pMD19-T simple的检测与测序 | 第37-38页 |
| 5 转化子的菌体PCR验证和重组质粒的酶切验证 | 第38页 |
| 6 TaSUT1基因测序结果 | 第38-43页 |
| 8 亚细胞定位分析 | 第43-45页 |
| 四、讨论 | 第45-47页 |
| 第二章 小麦幼苗TaSUT1基因的表达研究 | 第47-59页 |
| 一、实验材料、试剂和仪器 | 第47页 |
| 实验仪器 | 第47页 |
| 二、实验方法 | 第47-50页 |
| 1 设计半定量的特异性引物 | 第47-48页 |
| 2 半定量分析TaSUT1表达情况 | 第48页 |
| 3 荧光定量PCR分析TaSUT1基因的表达 | 第48-50页 |
| 三、实验结果 | 第50-57页 |
| 1 半定量RT-PCR分析 | 第50-57页 |
| 四、讨论 | 第57-59页 |
| 第三章 农杆菌介导的小麦愈伤的转化 | 第59-68页 |
| 一、实验材料 | 第59-61页 |
| 1 植物材料 | 第59页 |
| 2 菌种和质粒载体 | 第59页 |
| 3 试剂 | 第59页 |
| 4 培养基 | 第59-61页 |
| 二、实验方法 | 第61-63页 |
| 1 农杆菌载体的构建及转化小麦愈伤 | 第61页 |
| 2 农杆菌侵染法介导小麦愈伤的遗传转化 | 第61-63页 |
| 三、结果与分析 | 第63-66页 |
| 1 TaSUT1基因过表达载体构建策略 | 第63-66页 |
| 四、讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 基因枪法介导的小麦转化研究 | 第68-85页 |
| 一、实验材料及实验仪器 | 第68-70页 |
| 1 植物材料 | 第68页 |
| 2 菌株和质粒载体 | 第68页 |
| 3 试剂 | 第68页 |
| 4 培养基 | 第68-69页 |
| 5 实验仪器 | 第69-70页 |
| 二、实验方法 | 第70-76页 |
| 1 TaSUT1基因过表达载体的构建 | 第70页 |
| 2 TaSUT1基因干扰载体的构建 | 第70-72页 |
| 3 高浓度质粒的提取 | 第72-73页 |
| 4 转基因实验程序 | 第73-75页 |
| 5 转化植株总DNA的提取及PCR检测 | 第75-76页 |
| 三、结果与分析 | 第76-83页 |
| 1 TaSUT1基因过表达载体构建 | 第76-78页 |
| 2 pUBI::Bar共转化质粒酶切验证 | 第78-79页 |
| 3 RNAi干扰载体的构建 | 第79-81页 |
| 4 植株再生 | 第81-82页 |
| 5 转基因植株检测 | 第82-83页 |
| 四、讨论 | 第83-85页 |
| 结论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 附注 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
