| 致谢 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12页 |
| 1 文献综述 | 第13-34页 |
| 1.1 褐飞虱简介及其危害 | 第13-15页 |
| 1.1.1 褐飞虱简介 | 第13-14页 |
| 1.1.2 褐飞虱危害 | 第14-15页 |
| 1.2 褐飞虱防治方法 | 第15-20页 |
| 1.2.1 抗性品种选育 | 第15-16页 |
| 1.2.2 化学防治 | 第16-17页 |
| 1.2.3 生物防治 | 第17-19页 |
| 1.2.4 健壮栽培 | 第19页 |
| 1.2.5 物理防治 | 第19页 |
| 1.2.6 转基因技术防治 | 第19-20页 |
| 1.3 RNAI简介及在昆虫防治中的应用 | 第20-34页 |
| 1.3.1 RNA干扰的作用机理 | 第20-23页 |
| 1.3.2 RNAi的特点 | 第23-24页 |
| 1.3.2.1 特异性 | 第23页 |
| 1.3.2.2 高效性 | 第23页 |
| 1.3.2.3 普遍性 | 第23-24页 |
| 1.3.2.4 快速性及时间效应 | 第24页 |
| 1.3.2.5 可遗传及可扩散性 | 第24页 |
| 1.3.3 昆虫RNAi的发现及定义 | 第24-26页 |
| 1.3.3.1 昆虫RNAi的发现 | 第24-25页 |
| 1.3.3.2 昆虫RNAi的定义 | 第25-26页 |
| 1.3.4 dsRNA吸收机制 | 第26-28页 |
| 1.3.5 昆虫中RNAi实现方法 | 第28-30页 |
| 1.3.5.1 浸泡 | 第28页 |
| 1.3.5.2 注射 | 第28-29页 |
| 1.3.5.3 饲喂 | 第29-30页 |
| 1.3.5.4 转基因 | 第30页 |
| 1.3.5.5 病毒介导 | 第30页 |
| 1.3.6 RNAi在害虫防治中的应用 | 第30-31页 |
| 1.3.7 影响RNAi效果的因素 | 第31-34页 |
| 1.3.7.1 dsRNA的浓度 | 第31-32页 |
| 1.3.7.2 dsRNA片段长度 | 第32页 |
| 1.3.7.3 核苷酸序列 | 第32页 |
| 1.3.7.4 目标昆虫的生命周期 | 第32页 |
| 1.3.7.5 物种或器官的差异 | 第32-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-44页 |
| 2.1 材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 菌株 | 第34页 |
| 2.1.2 动植物材料 | 第34页 |
| 2.1.3 质粒载体 | 第34页 |
| 2.1.4 试剂盒及核酸标准 | 第34页 |
| 2.1.5 主要酶类 | 第34页 |
| 2.1.6 其他试剂 | 第34-35页 |
| 2.1.7 仪器 | 第35页 |
| 2.2 方法 | 第35-44页 |
| 2.2.1 分子生物学方法 | 第35-41页 |
| 2.2.1.1 TRIzol法提取RNA | 第35页 |
| 2.2.1.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第35-36页 |
| 2.2.1.3 凝胶回收 | 第36-37页 |
| 2.2.1.4 大肠杆菌TG1感受态细胞的制备及转化 | 第37-38页 |
| 2.2.1.5 根瘤农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第38-39页 |
| 2.2.1.6 质粒提取 | 第39页 |
| 2.2.1.7 Northern Blot | 第39-41页 |
| 2.2.2 农杆菌介导的外源基因水稻转化方法 | 第41-43页 |
| 2.2.2.1 水稻成熟胚愈伤组织的诱导 | 第41页 |
| 2.2.2.2 农杆菌与水稻愈伤的共培养 | 第41-42页 |
| 2.2.2.3 抗性愈伤组织的筛选 | 第42页 |
| 2.2.2.4 转化植株的再生与培养 | 第42-43页 |
| 2.2.3 转基因水稻褐飞虱生物活性检测方法 | 第43-44页 |
| 3 干扰载体构建及水稻转化检测 | 第44-52页 |
| 3.1 干扰载体构建 | 第44-50页 |
| 3.1.1 褐飞虱RNA的提取及cDNA的合成 | 第44页 |
| 3.1.2 褐飞虱基因145、282、303、246干扰片段的克隆 | 第44-48页 |
| 3.1.2.1 基因145、282、303、246干扰片段引物设计 | 第45-48页 |
| 3.1.2.2 基因145、282、303、246干扰片段的获得 | 第48页 |
| 3.1.3 干扰片段T-Easy载体构建 | 第48-49页 |
| 3.1.4 干扰载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.2 水稻转化及后期检测 | 第50-52页 |
| 3.2.1 水稻转化 | 第50-51页 |
| 3.2.2 T_0代转基因水稻褐飞虱生物活性测定 | 第51页 |
| 3.2.3 T_1代转基因水稻后期检测 | 第51-52页 |
| 3.2.3.1 Northern Blot检测T_1代水稻中dsRNA的表达 | 第51页 |
| 3.2.3.2 T_1代转基因水稻的褐飞虱生物活性测定 | 第51-52页 |
| 4 结果与分析 | 第52-58页 |
| 4.1 基因145、282、303、246干扰片段的获得 | 第52页 |
| 4.2 干扰片段T-EASY载体构建 | 第52-53页 |
| 4.3 干扰载体的构建 | 第53页 |
| 4.4 水稻转化 | 第53-54页 |
| 4.5 T_0代转基因水稻褐飞虱生物活性测定 | 第54-55页 |
| 4.6 T_1代转基因水稻NORTHERN BLOT | 第55-57页 |
| 4.7 T_1代转基因水稻的褐飞虱生物活性测定 | 第57-58页 |
| 5 讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-73页 |
| 作者简历 | 第73-74页 |
| 附录Ⅰ 常用生化试剂及仪器 | 第74-76页 |
| 附录Ⅱ 实验所用溶液 | 第76-82页 |
| 附录Ⅲ 褐飞虱生物活性测定结果 | 第82-85页 |
