| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第7-9页 |
| 第一章 NOTCH1基因的真核表达载体shRNA的构建及鉴定 | 第9-14页 |
| 1.1 材料 | 第9页 |
| 1.2 shRNA重组质粒的构建 | 第9-10页 |
| 1.2.1 退火 | 第9-10页 |
| 1.2.2 连接 | 第10页 |
| 1.2.3 转化大肠杆菌 | 第10页 |
| 1.2.4 摇菌 | 第10页 |
| 1.3 shRNA重组质粒的鉴定 | 第10-14页 |
| 1.3.1 质粒提取 | 第10-11页 |
| 1.3.2 酶切、电泳检测 | 第11页 |
| 1.3.3 细胞的传代和培养 | 第11-12页 |
| 1.3.4 稳定转染pGenesil-NOTCH1-shRNA | 第12页 |
| 1.3.5 Trizol法提取细胞总RNA | 第12-13页 |
| 1.3.6 逆转录 | 第13页 |
| 1.3.7 qRT-PC | 第13-14页 |
| 第二章 shRNA沉默NOTCH1基因对MCF-7细胞增殖影响 | 第14-20页 |
| 2.1 材料 | 第14页 |
| 2.2 细胞复苏 | 第14-15页 |
| 2.3 细胞的传代和培养 | 第15页 |
| 2.4 细胞收集 | 第15页 |
| 2.5 Westernblot | 第15-18页 |
| 2.5.1 总蛋白提取 | 第15-16页 |
| 2.5.2 BCA法检测蛋白浓度 | 第16页 |
| 2.5.3 Western blot实验 | 第16-18页 |
| 2.6 MTT | 第18-19页 |
| 2.7 统计学方法 | 第19-20页 |
| 第三章 结果 | 第20-26页 |
| 3.1 重组真核表达载体检测 | 第20-23页 |
| 3.1.1 酶切检测 | 第20页 |
| 3.1.2 序列检测 | 第20-23页 |
| 3.2 qRT-PCR检测Notch1mRNA的表达 | 第23页 |
| 3.3 Western blotting检测Notch1蛋白的表达 | 第23-24页 |
| 3.4 MTT检测 | 第24-26页 |
| 讨论 | 第26-28页 |
| 结论 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-32页 |
| 综述 | 第32-41页 |
| 综述参考文献 | 第37-41页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
