| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-26页 |
| 1.1 奶山羊概述 | 第13-15页 |
| 1.1.1 西农萨能奶山羊简介 | 第13页 |
| 1.1.2 山羊奶营养价值 | 第13-14页 |
| 1.1.3 乳的生成 | 第14-15页 |
| 1.2 催乳素的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.1 PRL/GH/PL激素家族 | 第15页 |
| 1.2.2 PRL基因和初级结构 | 第15-16页 |
| 1.2.3 催乳素的三级结构 | 第16页 |
| 1.2.4 PRL的外周分泌 | 第16-17页 |
| 1.2.5 PRL促进乳腺发育 | 第17页 |
| 1.2.6 PRL的其他功能 | 第17-18页 |
| 1.3 催乳素受体的研究进展 | 第18-23页 |
| 1.3.1 细胞因子受体家族 | 第18页 |
| 1.3.2 PRLR基因和初级结构 | 第18-21页 |
| 1.3.3 PRLR的组织分布与表达 | 第21-22页 |
| 1.3.4 PRLR介导的信号通路 | 第22-23页 |
| 1.4 PRL/PRLR对乳腺物质代谢的调控 | 第23-24页 |
| 1.4.1 乳蛋白生成的调控 | 第23页 |
| 1.4.2 乳糖生成的调控 | 第23-24页 |
| 1.4.3 乳脂代谢的调控 | 第24页 |
| 1.5 腺病毒介导的shRNA干扰 | 第24-25页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 奶山羊PRLR基因CDs区的克隆、序列分析与组织表达 | 第26-38页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-30页 |
| 2.1.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.2 方法 | 第27-30页 |
| 2.2 结果 | 第30-35页 |
| 2.2.1 西农萨能羊泌乳盛期乳腺组织总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.2 西农萨能羊干奶期10个组织总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.3 西农萨能羊PRLR基因的克隆 | 第31-33页 |
| 2.2.4 西农萨能羊PRLR基因CDs区同源性分析 | 第33页 |
| 2.2.5 西农萨能羊PRLR的信号肽和跨膜结构的分析 | 第33-34页 |
| 2.2.6 西农萨能羊PRLR一级结构生物信息学分析 | 第34页 |
| 2.2.7 西农萨能羊PRLR蛋白的三级结构预测 | 第34-35页 |
| 2.2.8 总PRLR mRNA在干奶期组织表达分析 | 第35页 |
| 2.3 讨论 | 第35-37页 |
| 2.3.1 RT-qPCR引物的设计 | 第35-36页 |
| 2.3.2 西农萨能羊PRLR序列特征 | 第36页 |
| 2.3.3 PRLR基因的组织表达情况 | 第36-37页 |
| 2.4 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 PRL调控PRLR及下游基因的表达 | 第38-44页 |
| 3.1 材料与方法 | 第38-41页 |
| 3.1.1 材料 | 第38页 |
| 3.1.2 方法 | 第38-41页 |
| 3.2 结果与分析 | 第41-42页 |
| 3.2.1 PRL对PRLR表达的影响 | 第41页 |
| 3.2.2 PRL对其他基因表达的影响 | 第41-42页 |
| 3.3 讨论 | 第42-43页 |
| 3.3.1 PRL激活PRLR及下游基因的表达 | 第42页 |
| 3.3.2 PRL介导PRLR蛋白的降解 | 第42-43页 |
| 3.4 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 腺病毒介导的PRLR基因的RNA干扰 | 第44-61页 |
| 4.1 材料与方法 | 第44-52页 |
| 4.1.1 材料 | 第44-45页 |
| 4.1.2 方法 | 第45-52页 |
| 4.2 结果 | 第52-58页 |
| 4.2.1 构建pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA穿梭载体 | 第52页 |
| 4.2.2 重组腺病毒载体的构建及鉴定 | 第52-53页 |
| 4.2.3 腺病毒包装、扩增 | 第53页 |
| 4.2.4 病毒滴度和最佳MOI值的测定 | 第53-54页 |
| 4.2.5 PRLR腺病毒干扰载体的干扰效率 | 第54-55页 |
| 4.2.6 PRLR干扰对乳腺上皮细胞靶基因的mRNA表达的影响 | 第55-56页 |
| 4.2.7 油红O检测脂滴含量 | 第56-57页 |
| 4.2.8 细胞甘油三酯和胆固醇含量的测定 | 第57-58页 |
| 4.3 讨论 | 第58-60页 |
| 4.3.1 shRNA的设计原则 | 第58页 |
| 4.3.2 腺病毒干扰载体的干扰效率 | 第58-59页 |
| 4.3.3 PRLR在营养物质代谢中的作用 | 第59-60页 |
| 4.3.4 细胞甘油三酯的含量 | 第60页 |
| 4.4 小结 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-71页 |
| 附录1：目的基因片段的凝胶纯化回收 | 第68-69页 |
| 附录2：大肠杆菌质粒的提取 | 第69-70页 |
| 附录3：细胞复苏与传代培养方法 | 第70-71页 |
| 缩略词表 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介 | 第73页 |
