| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 主要英文缩略词对照表 | 第10-11页 |
| 第1章 前言 | 第11-36页 |
| 1.1 胚胎发育研究史和模式生物 | 第11-14页 |
| 1.1.1 胚胎发育研究史 | 第11-12页 |
| 1.1.2 胚胎发育研究的几种模式生物 | 第12-14页 |
| 1.2 爪蛙胚胎的早期发育过程 | 第14-19页 |
| 1.2.1 卵母细胞的生成和母源因子储备 | 第14页 |
| 1.2.2 受精和皮层转动 | 第14-15页 |
| 1.2.3 卵裂期和细胞分裂 | 第15-16页 |
| 1.2.4 囊胚期和MBT | 第16页 |
| 1.2.5 原肠胚期和细胞重排 | 第16-17页 |
| 1.2.6 神经胚期和神经管形成 | 第17-18页 |
| 1.2.7 尾牙期和器官形成 | 第18页 |
| 1.2.8 蝌蚪期及个体生长 | 第18-19页 |
| 1.3 爪蛙胚层分化过程和调控机制 | 第19-28页 |
| 1.3.1 三胚层分化 | 第19-20页 |
| 1.3.2 母源因子在胚胎早期发育中具有重要的功能 | 第20-21页 |
| 1.3.3 胚胎早期发育过程受到多种信号通路调控 | 第21-24页 |
| 1.3.4 内胚层的分化和调控机制 | 第24页 |
| 1.3.5 中胚层的分化和调控机制 | 第24-26页 |
| 1.3.6 外胚层的分化和调控机制 | 第26-28页 |
| 1.4 Ascl1的结构及功能 | 第28-32页 |
| 1.4.1 Ascl1的结构及同源性 | 第28-29页 |
| 1.4.2 Ascl1在神经发育中的功能 | 第29-31页 |
| 1.4.3 Ascl1的转录调控研究 | 第31-32页 |
| 1.5 HDAC家族和蛋白功能 | 第32-34页 |
| 1.6 研究的问题和内容 | 第34-35页 |
| 1.7 论文结构 | 第35-36页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第36-52页 |
| 2.1 仪器设备 | 第36页 |
| 2.2 实验试剂 | 第36-39页 |
| 2.2.1 细胞和胚胎培养试剂 | 第36页 |
| 2.2.2 分子生化实验试剂 | 第36-37页 |
| 2.2.3 溶液配制 | 第37-39页 |
| 2.3 胚胎相关实验方法 | 第39-41页 |
| 2.3.1 爪蛙的饲养 | 第39页 |
| 2.3.2 胚胎体外授精和注射 | 第39-40页 |
| 2.3.3 Host transfer技术 | 第40页 |
| 2.3.4 动物极帽的分离和诱导 | 第40页 |
| 2.3.5 胚胎原位杂交 | 第40-41页 |
| 2.4 细胞相关实验方法 | 第41-42页 |
| 2.4.1 细胞培养 | 第41-42页 |
| 2.4.2 质粒转染 | 第42页 |
| 2.5 分子生化相关实验方法 | 第42-52页 |
| 2.5.1 质粒构建 | 第42-43页 |
| 2.5.2 mRNA体外转录 | 第43-44页 |
| 2.5.3 探针的合成 | 第44-45页 |
| 2.5.4 RNA的提取和反转录 | 第45-46页 |
| 2.5.5 实时荧光定量PCR | 第46-48页 |
| 2.5.6 荧光报告基因检测 | 第48页 |
| 2.5.7 免疫印迹 | 第48-49页 |
| 2.5.8 免疫共沉淀 | 第49页 |
| 2.5.9 染色质免疫共沉淀 | 第49-52页 |
| 第3章 Ascl1在胚胎中的时间和空间表达分析 | 第52-57页 |
| 3.1 Ascl1 mRNA在胚胎发育时间和空间上的表达模式 | 第52-54页 |
| 3.2 Ascl1蛋白在胚胎发育时间和空间上的表达模式 | 第54-55页 |
| 3.3 讨论 | 第55-56页 |
| 3.4 小结 | 第56-57页 |
| 第4章 过量表达Ascl1抑制中内胚层基因的表达 | 第57-65页 |
| 4.1 过量表达Ascl1导致中内胚层基因下调 | 第57-58页 |
| 4.2 Ascl1抑制VegT诱导中内胚层基因的过程 | 第58-61页 |
| 4.2.1 Ascl1抑制VegT诱导的中内胚层基因 | 第58-60页 |
| 4.2.2 Ascl1直接抑制VegT诱导中内胚层基因的过程 | 第60-61页 |
| 4.3 Ascl1不影响Nodal/Activin诱导的中内胚层基因的表达 | 第61-63页 |
| 4.3.1 Ascl1不影响Nodal/Activin信号通路及其诱导中内胚层基因 | 第61-62页 |
| 4.3.2 Xnr1拯救Ascl1对中内胚层基因的抑制作用 | 第62-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-64页 |
| 4.5 小结 | 第64-65页 |
| 第5章 敲降Ascl1导致中内胚层基因上调 | 第65-76页 |
| 5.1 Ascl1 MO有效性验证 | 第65-67页 |
| 5.2 Ascl1 MO特异性验证 | 第67-69页 |
| 5.3 RNA-seq结果表明Ascl1抑制中内胚层分化 | 第69-71页 |
| 5.4 敲降Ascl1导致中内胚层基因上调 | 第71-73页 |
| 5.5 Ascl1对中内胚层基因的调控依赖于VegT | 第73-74页 |
| 5.6 讨论 | 第74-75页 |
| 5.7 小结 | 第75-76页 |
| 第6章 Ascl1通过HDAC1依赖的方式抑制VegT的活性 | 第76-88页 |
| 6.1 Ascl1蛋白N端具有抑制中内胚层基因的活性 | 第76-77页 |
| 6.2 Ascl1蛋白N端与HDAC1相互作用 | 第77-79页 |
| 6.3 HDAC1抑制中内胚层基因的表达 | 第79-82页 |
| 6.3.1 敲降HDAC1上调中内胚层基因 | 第79-81页 |
| 6.3.2 过量表达HDAC1抑制中内胚层基因的表达 | 第81-82页 |
| 6.4 Ascl1影响VegT靶基因上的乙酰化水平 | 第82-84页 |
| 6.5 Ascl1依赖HDAC1活性抑制中内胚层基因 | 第84-86页 |
| 6.6 讨论 | 第86-87页 |
| 6.7 小结 | 第87-88页 |
| 第7章 Ascl1通过直接结合VegT的方式抑制其功能 | 第88-95页 |
| 7.1 Ascl1不通过结合E-box序列抑制Xnr1-luc活性 | 第88-89页 |
| 7.2 Ascl1可结合在Bix4启动子的T-box序列上 | 第89-90页 |
| 7.3 Ascl1蛋白N端和VegT有相互作用 | 第90-92页 |
| 7.4 VegT依赖HAT活性调控靶基因的转录 | 第92-93页 |
| 7.5 讨论 | 第93-94页 |
| 7.6 小结 | 第94-95页 |
| 第8章 Ascl1赋予外胚层神经分化潜能 | 第95-105页 |
| 8.1 敲降Ascl1影响神经干性基因sox2的表达 | 第95-96页 |
| 8.2 敲降Ascl1影响神经前体基因的表达 | 第96-97页 |
| 8.3 Ascl1是神经分化充分且必要的调控因子 | 第97-100页 |
| 8.3.1 敲降Ascl1导致神经分化缺陷 | 第97-98页 |
| 8.3.2 Ascl1异位诱导神经分化基因 | 第98-100页 |
| 8.4 母源和合子Ascl1在胚胎早期发育中的功能对比 | 第100-103页 |
| 8.5 讨论 | 第103-104页 |
| 8.6 小结 | 第104-105页 |
| 第9章 总结与展望 | 第105-112页 |
| 9.1 论文结论 | 第105-107页 |
| 9.2 讨论 | 第107-110页 |
| 9.2.1 母源Ascl1在胚层分化中的功能具有双重性 | 第107-108页 |
| 9.2.2 母源Ascl1通过一种新的机制调控基因的转录 | 第108-109页 |
| 9.2.3 Ascl1与其他外胚层因子在对抗中内胚层机制上的区别 | 第109页 |
| 9.2.4 VegT依赖HAT活性调控靶基因的转录 | 第109-110页 |
| 9.3 展望 | 第110-112页 |
| 9.3.1 Ascl1与HDCA1的相互作用在神经元分化中的研究 | 第110页 |
| 9.3.2 Ascl1蛋白稳定性和活性调控研究 | 第110-111页 |
| 9.3.3 Ascl1蛋白N端和C端不同的功能进一步研究 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-127页 |
| 致谢 | 第127-130页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第130页 |
