| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语中英文对照表 | 第11-12页 |
| 文献综述部分 | 第12-42页 |
| 第一章 动物生物反应器 | 第12-20页 |
| 1 转基因动物生物反应器优势 | 第12-13页 |
| 2 转基因生物反应器平台的建立 | 第13-16页 |
| 2.1 乳腺生物反应器 | 第13-14页 |
| 2.2 血液和禽蛋动物生物反应器 | 第14-15页 |
| 2.3 尿液和精液动物生物反应器 | 第15-16页 |
| 2.4 蚕茧生物反应器 | 第16页 |
| 2.5 其它 | 第16页 |
| 3 各种动物生物反应器获得的成就 | 第16-17页 |
| 4 结论 | 第17-20页 |
| 第二章 转基因鸡生物反应器 | 第20-28页 |
| 1 转基因鸡生物反应器的发展 | 第20-21页 |
| 2 转基因鸡生物反应器的价值 | 第21-24页 |
| 2.1 鸡蛋中的主要蛋白成分 | 第21-23页 |
| 2.2 蛋白的糖基化修饰 | 第23页 |
| 2.3 转基因鸡生物反应器的其他优势 | 第23-24页 |
| 3 建立一个转基因鸡反应器需要的步骤 | 第24-27页 |
| 3.1 生产转基因鸡的方法 | 第24-25页 |
| 3.2 逆转录病毒载体法 | 第25-26页 |
| 3.3 转基因鸡中重组蛋白的表达 | 第26-27页 |
| 4 结论 | 第27-28页 |
| 第三章 慢病毒转基因技术 | 第28-42页 |
| 1 慢病毒的组成 | 第28-31页 |
| 2 慢病毒载体构建的发展 | 第31-35页 |
| 2.1 第一代慢病毒载体的设计 | 第31页 |
| 2.2 慢病毒载体技术的进一步优化 | 第31-35页 |
| 3 慢病毒的包装生产 | 第35-39页 |
| 3.1 构建能长期稳定表达慢病毒载体所用的细胞系 | 第35-36页 |
| 3.2 质粒瞬时转染法生产慢病毒载体 | 第36-38页 |
| 3.3 有助于病毒生产的添加物 | 第38-39页 |
| 4 病毒载体体内特异性打靶 | 第39-40页 |
| 5 结论 | 第40-42页 |
| 实验研究部分 | 第42-80页 |
| 第四章 生产慢病毒新方法的研究 | 第42-62页 |
| 1 材料与仪器 | 第42-44页 |
| 1.1 主要实验材料与试剂 | 第42-43页 |
| 1.2 主要实验仪器 | 第43-44页 |
| 2 实验方法 | 第44-53页 |
| 2.1 质粒DNA的转化 | 第44页 |
| 2.2 质粒的小量制备提取 | 第44-45页 |
| 2.3 质粒的酶切鉴定 | 第45页 |
| 2.4 质粒的菌液PCR鉴定 | 第45-46页 |
| 2.5 慢病毒核心载体质粒的构建 | 第46页 |
| 2.6 无内毒素质粒小量制备提取 | 第46-47页 |
| 2.7 293T细胞的培养 | 第47-48页 |
| 2.8 使用脂质体作为转染试剂生产慢病毒 | 第48页 |
| 2.9 使用PEI作为转染试剂细胞生产慢病毒 | 第48-49页 |
| 2.10 慢病毒的浓缩 | 第49页 |
| 2.11 慢病毒物理颗粒滴度的测定 | 第49-51页 |
| 2.12 慢病毒效价滴度的测定 | 第51页 |
| 2.13 测定N/P和转染DNA总量的不同对获得慢病毒滴度的影响 | 第51页 |
| 2.14 测定293T细胞培养基中FBS,氯喹,GlutaMax的存在对获得慢病毒滴度的影响 | 第51-52页 |
| 2.15 测定转染时细胞数目的不同对获得慢病毒滴度的影响 | 第52页 |
| 2.16 测定转染16h后是否换液对获得慢病毒滴度的影响 | 第52页 |
| 2.17 测定PEI工作液pH值的不同对获得慢病毒滴度的影响 | 第52页 |
| 2.18 统计学处理 | 第52-53页 |
| 3 实验结果 | 第53-59页 |
| 3.1 慢病毒质粒的构建与鉴定 | 第53-54页 |
| 3.2 脂质体法与PEI法生产慢病毒所获滴度的比较 | 第54-56页 |
| 3.3 N/P值和转染DNA总量对获得慢病毒滴度的影响 | 第56页 |
| 3.4 培养基中FBS,氯喹,GlutaMax对慢病毒滴度的影响 | 第56-57页 |
| 3.5 转染时细胞数目的不同对获得慢病毒滴度的影响 | 第57-58页 |
| 3.6 转染16h后是否换液对获得慢病毒滴度的影响 | 第58页 |
| 3.7 PEI工作液pH值的不同对获得慢病毒滴度的影响 | 第58-59页 |
| 4 讨论与结论 | 第59-62页 |
| 第五章 慢病毒载体法生产转基因鸡的研究 | 第62-68页 |
| 1 材料与仪器 | 第63页 |
| 1.1 主要实验仪器 | 第63页 |
| 1.2 主要实验材料与试剂 | 第63页 |
| 2 实验方法 | 第63-64页 |
| 2.1 种蛋的开窗注射与孵化 | 第63-64页 |
| 3 实验结果 | 第64-65页 |
| 4 讨论与结论 | 第65-68页 |
| 第六章 外源基因嵌合型转基因鸡个体的筛选 | 第68-80页 |
| 1 材料与仪器 | 第68页 |
| 1.1 主要实验仪器 | 第68页 |
| 1.2 主要实验材料与试剂 | 第68页 |
| 2 实验方法 | 第68-74页 |
| 2.1 鸡尿囊绒毛膜提基因组DNA的提取 | 第68-69页 |
| 2.2 鸡血液基因组DNA的提取 | 第69-70页 |
| 2.3 鸡胚转基因个体的PCR检测 | 第70-72页 |
| 2.4 嵌合型转基因鸡阳性个体ELISA检测 | 第72页 |
| 2.5 嵌合型转基因鸡阳性个体所产鸡蛋中外源重组蛋白Western Blot检测 | 第72-74页 |
| 3 实验结果 | 第74-78页 |
| 3.1 对嵌合体小鸡进行PCR初步筛选 | 第74-76页 |
| 3.2 转基因鸡阳性率统计 | 第76页 |
| 3.3 转基因鸡的进一步筛选 | 第76-78页 |
| 4 讨论与结论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 全文结论 | 第88-90页 |
| 附录 | 第90-98页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第98-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
