Nudix水解酶NudJ在PAPS合成中的应用
| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-24页 |
| 1.1 肝素概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 肝素的结构 | 第15-16页 |
| 1.1.2 肝素的生理作用 | 第16页 |
| 1.1.3 肝素的合成方法 | 第16-17页 |
| 1.2 PAPS概述 | 第17-18页 |
| 1.2.1 PAPS结构及生理作用 | 第17页 |
| 1.2.2 PAPS在肝素酶法合成过程中的应用 | 第17页 |
| 1.2.3 PAPS体外酶法合成 | 第17-18页 |
| 1.3 Nudix水解酶概述 | 第18-22页 |
| 1.3.1 Nudix水解酶的来源 | 第19-20页 |
| 1.3.2 大肠杆菌中的Nudix水解酶性质 | 第20-22页 |
| 1.3.3 Nudix水解酶国内外研究现状 | 第22页 |
| 1.4 课题研究目的意义以及研究的主要内容 | 第22-24页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 Nudix水解酶的表达纯化 | 第24-40页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第24-35页 |
| 2.1.1 材料与试剂 | 第24页 |
| 2.1.2 仪器与设备 | 第24-25页 |
| 2.1.4 菌株及质粒 | 第25页 |
| 2.1.5 主要溶液配制及培养基 | 第25-26页 |
| 2.1.6 菌株培养方法 | 第26-27页 |
| 2.1.7 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.1.8 分析方法 | 第31-33页 |
| 2.1.9 数据处理 | 第33-35页 |
| 2.2 结果与分析 | 第35-39页 |
| 2.2.1 NudJ基因克隆 | 第35-36页 |
| 2.2.2 菌落PCR | 第36页 |
| 2.2.3 蛋白表达纯化 | 第36-38页 |
| 2.2.4 蛋白定量 | 第38-39页 |
| 2.3 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 Nudix水解酶酶学性质 | 第40-48页 |
| 3.1 材料与方法 | 第40-43页 |
| 3.1.1 材料与试剂 | 第40页 |
| 3.1.2 仪器与设备 | 第40-41页 |
| 3.1.3 主要溶液配制 | 第41页 |
| 3.1.4 反应体系 | 第41-42页 |
| 3.1.5 反应体系分析——高效液相色谱 | 第42-43页 |
| 3.2 结果分析 | 第43-47页 |
| 3.2.1 NudJ酶活分析 | 第44-47页 |
| 3.3 本章小结 | 第47-48页 |
| 第四章 PAPS合成纯化及鉴定 | 第48-57页 |
| 4.1 材料与方法 | 第48-50页 |
| 4.1.1 材料与试剂 | 第48页 |
| 4.1.2 仪器与设备 | 第48页 |
| 4.1.3 相关溶液的配制 | 第48-49页 |
| 4.1.4 PAPS合成体系 | 第49页 |
| 4.1.5 高效液相色谱法检测PAPS合成体系 | 第49页 |
| 4.1.6 PAPS纯化方法(蛋白纯化系统) | 第49页 |
| 4.1.7 质谱鉴定PAPS | 第49-50页 |
| 4.2 结果与分析 | 第50-54页 |
| 4.2.1 三种粗酶合成PAPS体系分析 | 第50-51页 |
| 4.2.2 三种纯化的酶合成PAPS体系分析 | 第51页 |
| 4.2.3 Nudix水解酶合成PAPS体系分析 | 第51-52页 |
| 4.2.4 蛋白纯化系统纯化PAPS结果分析 | 第52-53页 |
| 4.2.5 质谱鉴定PAPS结果分析 | 第53-54页 |
| 4.3 讨论 | 第54-55页 |
| 4.4 本章小结 | 第55-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 攻读学位期间的学术活动及结果清单 | 第66页 |
