| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第16-33页 |
| 1.1 不饱和脂肪酸的种类与功能 | 第16-20页 |
| 1.1.1 脂肪酸的种类与命名 | 第16-17页 |
| 1.1.2 不饱和脂肪酸的功能 | 第17-20页 |
| 1.2 脂肪酸去饱和酶(FAD)研究进展 | 第20-28页 |
| 1.2.1 FAD的结构与功能 | 第21-22页 |
| 1.2.2 FAD的类型 | 第22-23页 |
| 1.2.3 FAD催化不饱和脂肪酸的生物合成途径 | 第23-24页 |
| 1.2.4 FAD基因的克隆与表达的研究 | 第24-28页 |
| 1.3 微藻的FAD基因的克隆、表达与调控的研究 | 第28-31页 |
| 1.3.1 原核微藻FAD基因的克隆、表达与调控的研究 | 第29-30页 |
| 1.3.2 真核微藻FAD基因的克隆、表达与调控的研究 | 第30-31页 |
| 1.4 微藻培养生产PUFAs展望 | 第31页 |
| 1.5 本文的创新点及研究意义 | 第31-33页 |
| 1.5.1 本文的创新点 | 第32页 |
| 1.5.2 本文的研究意义 | 第32-33页 |
| 第二章 富油微藻的筛选 | 第33-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第33-35页 |
| 2.1.1 实验试剂与仪器 | 第33-34页 |
| 2.1.2 藻种来源及培养 | 第34页 |
| 2.1.3 微藻总脂与脂肪酸分析 | 第34-35页 |
| 2.2 结果 | 第35-40页 |
| 2.2.1 微藻的总脂含量 | 第35-36页 |
| 2.2.2 微藻的脂肪酸组成与含量 | 第36-40页 |
| 2.3 讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 环境因子对球等鞭金藻生长以及总脂和脂肪酸组成与含量的影响 | 第43-56页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-45页 |
| 3.1.1 实验试剂与仪器 | 第44页 |
| 3.1.2 藻种培养 | 第44页 |
| 3.1.3 微藻总脂提取与脂肪酸分析 | 第44-45页 |
| 3.2 结果 | 第45-52页 |
| 3.2.1 不同环境因子对球等鞭金藻生长与总脂含量的影响 | 第45-48页 |
| 3.2.2 不同环境因子对球等鞭金藻脂肪酸组成与含量的影响 | 第48-52页 |
| 3.3 讨论 | 第52-56页 |
| 第四章 球等鞭金藻(I.galbana)△5和△12脂肪酸去饱和酶基因克隆与生物信息学分析 | 第56-76页 |
| 4.1 材料与方法 | 第56-64页 |
| 4.1.1 实验试剂与仪器 | 第56-57页 |
| 4.1.2 藻种培养 | 第57页 |
| 4.1.3 引物设计及合成 | 第57页 |
| 4.1.4 总RNA提取与鉴定 | 第57-59页 |
| 4.1.5 cDNA第一链的合成 | 第59页 |
| 4.1.6 cDNA特异片段的PCR扩增 | 第59-60页 |
| 4.1.7 目的片段的回收 | 第60-61页 |
| 4.1.8 连接T载体 | 第61页 |
| 4.1.9 感受态细胞转化 | 第61页 |
| 4.1.10 筛选阳性克隆及测序 | 第61-62页 |
| 4.1.11 3'-和5'-端的RACE-PCR扩增 | 第62-63页 |
| 4.1.12 生物信息学分析 | 第63-64页 |
| 4.2 结果 | 第64-74页 |
| 4.2.1 球等鞭金藻总RNA的提取鉴定 | 第64页 |
| 4.2.2 IgFAD5和IgFAD12序列片段分析 | 第64-65页 |
| 4.2.3 cDNA 3'-和5'-端的RACE-PCR扩增与鉴定 | 第65-66页 |
| 4.2.4 球等鞭金藻IgFAD5和IgFAD12基因ORF全长和蛋白序列分析 | 第66-73页 |
| 4.2.5 球等鞭金藻的系统进化树分析 | 第73-74页 |
| 4.3 讨论 | 第74-76页 |
| 第五章 球等鞭金藻(I.galbana)△5和△12脂肪酸去饱和酶基因的表达调控 | 第76-85页 |
| 5.1 材料与方法 | 第77-79页 |
| 5.1.1 实验试剂与仪器 | 第77页 |
| 5.1.2 藻种培养 | 第77-78页 |
| 5.1.3 引物设计及合成 | 第78页 |
| 5.1.4 总RNA提取与鉴定 | 第78页 |
| 5.1.5 cDNA第一链的合成 | 第78页 |
| 5.1.6 荧光实时定量PCR反应体系 | 第78页 |
| 5.1.7 数据分析 | 第78-79页 |
| 5.2 结果 | 第79-83页 |
| 5.2.1 荧光实时定量PCR(qRT-PCR)结果 | 第79-80页 |
| 5.2.2 不同温度对IgFAD5和IgFAD12基因的转录水平 | 第80-81页 |
| 5.2.3 不同盐度对IgFAD5和IgFAD12基因的转录水平 | 第81-82页 |
| 5.2.4 不同N浓度对IgFAD5和IgFAD12基因的转录水平 | 第82-83页 |
| 5.3 讨论 | 第83-85页 |
| 第六章 球等鞭金藻(I.galbana)△5和△12脂肪酸去饱和酶基因在酿酒酵母中的表达 | 第85-97页 |
| 6.1 材料与方法 | 第85-90页 |
| 6.1.1 实验试剂与仪器 | 第86页 |
| 6.1.2 引物设计及合成 | 第86-87页 |
| 6.1.3 总RNA提取与鉴定 | 第87页 |
| 6.1.4 cDNA第一链的合成 | 第87页 |
| 6.1.5 表达载体的构建 | 第87-89页 |
| 6.1.6 重组质粒的酿酒酵母S cerevisiae转化 | 第89-90页 |
| 6.1.7 重组酵母的诱导表达 | 第90页 |
| 6.1.8 酵母脂肪酸组成的测定 | 第90页 |
| 6.1.9 数据分析 | 第90页 |
| 6.2 结果 | 第90-94页 |
| 6.2.1 重组酵母的获得与PCR检测 | 第90-91页 |
| 6.2.2 重组质粒pYFAD5和pYFAD12的酵母表达及其对脂肪酸代谢的影响 | 第91-94页 |
| 6.3 讨论 | 第94-97页 |
| 参考文献 | 第97-114页 |
| 第七章 结论 | 第114-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第117页 |
