| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语索引 | 第14-16页 |
| 实验材料 | 第16-20页 |
| 实验仪器 | 第20-22页 |
| 实验试剂配方 | 第22-24页 |
| 第一章 绪论 | 第24-46页 |
| 1.1 失眠 | 第24页 |
| 1.2 镇静安神类药物的研究进展 | 第24-35页 |
| 1.2.1 镇静安神类西药的研究进展 | 第24-27页 |
| 1.2.2 天然药物药理作用的研究进展 | 第27-35页 |
| 1.3 G蛋白偶联受体 | 第35-36页 |
| 1.4 褪黑素及其受体概述 | 第36-40页 |
| 1.4.1 褪黑素的合成、分泌及代谢 | 第36-37页 |
| 1.4.2 褪黑素及其受体的结构 | 第37-38页 |
| 1.4.3 褪黑素受体介导的信号通路 | 第38-39页 |
| 1.4.4 褪黑素系统对睡眠的影响 | 第39-40页 |
| 1.5 荧光共振能量转移技术 | 第40-41页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第41-43页 |
| 1.7 本研究的实验方案和技术路线 | 第43-46页 |
| 1.7.1 构建载体 | 第43页 |
| 1.7.2 将构建完成的褪黑素受体分子探针瞬时转染到HEK 293T细胞 | 第43-44页 |
| 1.7.3 建立诱导表达质粒分子探针的稳定细胞株 | 第44页 |
| 1.7.4 稳定细胞株的鉴定 | 第44页 |
| 1.7.5 所构建质粒活性的检测 | 第44页 |
| 1.7.6 中药的粗提取及其活性成分的筛选 | 第44页 |
| 1.7.7 酶联免疫分析(ELISA)对中药活性的筛选 | 第44-46页 |
| 第二章 褪黑素受体分子探针质粒的构建 | 第46-70页 |
| 2.1 实验内容 | 第46-61页 |
| 2.1.1 构建含有MT_(1/2)的质粒分子探针 | 第46-55页 |
| 2.1.2 构建褪黑素受体质粒分子探针 | 第55-61页 |
| 2.2 实验结果 | 第61-68页 |
| 2.2.1 构建含MT_(1/2)质粒分子探针 | 第61-65页 |
| 2.2.2 构建褪黑素受体质粒分子探针 | 第65-68页 |
| 2.3 讨论 | 第68-69页 |
| 2.4 结论 | 第69-70页 |
| 第三章 褪黑素受体分子探针稳定细胞株的构建及验证 | 第70-84页 |
| 3.1 实验方法 | 第70-78页 |
| 3.1.1 细胞培养 | 第70页 |
| 3.1.2 细胞复苏 | 第70页 |
| 3.1.3 细胞传代 | 第70-71页 |
| 3.1.4 细胞冻存 | 第71页 |
| 3.1.5 细胞计数 | 第71-72页 |
| 3.1.6 细胞转染 | 第72-78页 |
| 3.2 实验结果 | 第78-83页 |
| 3.2.1 质粒瞬时转染HEK 293T细胞 | 第78-80页 |
| 3.2.2 质粒稳定转染Flp-InT-Rex HEK293细胞 | 第80-83页 |
| 3.3 讨论 | 第83页 |
| 3.4 结论 | 第83-84页 |
| 第四章 荧光共振能量转移检测中药对探针的作用 | 第84-88页 |
| 4.1 实验方法 | 第84页 |
| 4.2. FRET实验 | 第84页 |
| 4.3 实验结果 | 第84-85页 |
| 4.3.1 褪黑素受体激动剂Ramelteon处理细胞,获得FRET曲线 | 第84-85页 |
| 4.4 讨论 | 第85-86页 |
| 4.5 结论 | 第86-88页 |
| 第五章 利用褪黑素受检测中药对其信号通路的作用 | 第88-100页 |
| 5.1 实验方法 | 第88-90页 |
| 5.1.1 中药粗提取 | 第88页 |
| 5.1.2 ELISA中药筛选 | 第88-90页 |
| 5.2 实验结果 | 第90-98页 |
| 5.2.1 在细胞水平检测28种中药材以及Ramelteon对褪黑素受体的作用 | 第90-96页 |
| 5.2.2 ELISA检测人细胞磷酸化(p-ERK)的定量 | 第96-98页 |
| 5.3 讨论 | 第98-99页 |
| 5.4 结论 | 第99-100页 |
| 第六章 全文总结 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第112-114页 |
| 附录B MELATONIN RECEPTOR TYPE 1A编码基因序列 | 第114-116页 |
| 附录C MELATONIN RECEPTOR TYPE 1B编码基因序列 | 第116-118页 |
| 附录D 黄色荧光基团蛋白(EYFP)编码基因序列 | 第118-120页 |
| 附录E 青色荧光基团蛋白(TURQUOISE)编码基因序列 | 第120页 |
