| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略语 | 第15-21页 |
| 1.引言 | 第21-29页 |
| 2.仪器设备和试剂 | 第29-41页 |
| 2.1 仪器设备 | 第29-31页 |
| 2.2 主要生物化学试剂 | 第31-33页 |
| 2.3 抗体 | 第33-34页 |
| 2.4 所用溶液配方 | 第34-41页 |
| 2.4.1 细胞培养、转染相关溶液细胞培养、转染相关溶液 | 第34页 |
| 2.4.2 DNA琼脂糖凝胶电泳相关溶液 | 第34-35页 |
| 2.4.3 Western blot相关溶液 | 第35-38页 |
| 2.4.4 克隆相关试剂 | 第38页 |
| 2.4.5 染色质免疫共沉淀相关试剂 | 第38-41页 |
| 3.材料和方法 | 第41-65页 |
| 3.1. 实验材料 | 第41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-65页 |
| 3.2.1 荧光素酶报告基因载体的构建 | 第41-49页 |
| 3.2.1.1 全基因组DNA的提取 | 第41-42页 |
| 3.2.1.2 PCR | 第42-43页 |
| 3.2.1.3 PCR片段双酶切 | 第43页 |
| 3.2.1.4 PCR片段酶切产物的纯化回收 | 第43页 |
| 3.2.1.5 PGL3-basic质粒双酶切 | 第43-44页 |
| 3.2.1.6 DNA琼脂糖电泳后凝胶回收 | 第44-45页 |
| 3.2.1.7 连接反应 | 第45页 |
| 3.2.1.8 质粒转化 | 第45页 |
| 3.2.1.9 突变载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.2.1.10 质粒小抽 | 第46-47页 |
| 3.2.1.11 质粒大抽 | 第47-49页 |
| 3.2.2 荧光素酶报告基因检测 | 第49页 |
| 3.2.2.1 细胞转染 | 第49页 |
| 3.2.2.2 报告基因检测 | 第49页 |
| 3.2.3 Real-time PCR实验 | 第49-54页 |
| 3.2.3.1 细胞总RNA的提取 | 第49-50页 |
| 3.2.3.2 逆转录合成cDNA | 第50-51页 |
| 3.2.3.3 PCR扩增 | 第51页 |
| 3.2.3.4 Real-time RT-PCR | 第51-54页 |
| 3.2.4 Western Blot | 第54-55页 |
| 3.2.4.1 细胞全蛋白提取 | 第54页 |
| 3.2.4.2 BCA法检测蛋白质浓度 | 第54-55页 |
| 3.2.4.3 SDS变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹 | 第55页 |
| 3.2.5 免疫组织化学 | 第55-57页 |
| 3.2.6 染色质免疫共沉淀 | 第57-59页 |
| 3.2.7 MTT | 第59页 |
| 3.2.8 流式细胞仪检测细胞周期 | 第59-60页 |
| 3.2.9 平板细胞克隆形成实验 | 第60页 |
| 3.2.10 Transwell小室迁移实验 | 第60-61页 |
| 3.2.11 Transwell小室侵袭实验 | 第61页 |
| 3.2.12 EdU渗透实验 | 第61-62页 |
| 3.2.13 裸鼠成瘤及5-FU给药实验 | 第62-63页 |
| 3.2.14 临床样本分析 | 第63页 |
| 3.2.15 统计学分析 | 第63-65页 |
| 4 结果 | 第65-95页 |
| 4.1 构建过表达/干扰HMGA2的结直肠癌细胞系 | 第65-66页 |
| 4.1.1 不同结直肠癌细胞系中HMGA2的表达 | 第65页 |
| 4.1.2 建立稳定过表达/干扰HMGA2的单克隆结直肠癌细胞系 | 第65-66页 |
| 4.2 HMGA2促进结肠癌细胞迁移、侵袭、EMT以及增殖 | 第66-69页 |
| 4.2.1 HMGA2的变化对结直肠癌细胞系迁移、侵袭和EMT的影响 | 第66-67页 |
| 4.2.2 HMGA2的变化对结直肠癌细胞系增殖的影响 | 第67-69页 |
| 4.3 HMGA2促进结肠癌细胞的裸鼠皮下成瘤能力及EMT过程 | 第69-70页 |
| 4.4 HMGA2在对5-FU不敏感的结肠癌组织中表达上调 | 第70-72页 |
| 4.5 在体外,HMGA2促进结肠癌细胞对5-FU的耐受 | 第72-73页 |
| 4.6 在体内,HMGA2促进结肠癌对5-FU的耐受 | 第73-75页 |
| 4.7 HMGA2调控下游基因及信号通路的筛选 | 第75-86页 |
| 4.7.1 应用TCGA数据库分析HMGA2调控的下游基因及信号通路 | 第75-81页 |
| 4.7.2 应用表达谱芯片分析HMGA2调控的下游基因及信号通路 | 第81-86页 |
| 4.8 HMGA2通过转录调控Dv12促进结直肠癌细胞对5-FU的耐药 | 第86-90页 |
| 4.8.1 HMGA2能够与Dv12的启动子区域(-201/-185)直接结合,并激活其转录 | 第86-89页 |
| 4.8.2 HMGA2通过Dv12促进结直肠癌细胞系对5-FU的耐药 | 第89-90页 |
| 4.9 HMGA2活化调控Wn/β-catenin信号通路 | 第90-92页 |
| 4.10 在临床组织样本中Dv12的高表达促进结直肠癌对5-FU的耐药 | 第92-95页 |
| 5 讨论 | 第95-101页 |
| 6 结论 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-113页 |
| 综述 | 第113-141页 |
| References | 第128-141页 |
| 作者简历及在读期间所取得科研成果 | 第141页 |
