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新藤黄酸通过ROS/SIRT3/AMPK途径诱导黑色素瘤B16细胞自噬的机制研究

中文摘要第9-11页
Abstract第11-13页
英文缩略词表(Abbreviation)第14-16页
前言第16-22页
    1.研究目的与意义第16-17页
    2.细胞自噬第17-19页
    3.细胞自噬的信号调控第19-20页
    4.细胞自噬与肿瘤的关系第20-22页
第一部分 新藤黄酸对黑色素瘤B16细胞增殖的影响第22-30页
    1 实验材料与仪器第22-24页
        1.1 细胞株第22页
        1.2 药物第22页
        1.3 主要试剂第22页
        1.4 主要试剂的配制第22-23页
        1.5 主要仪器第23-24页
    2 实验方法第24-27页
        2.1 细胞复苏和冻存第24-25页
            2.1.1 细胞复苏第24页
            2.1.2 细胞冻存第24-25页
        2.2 细胞培养和传代第25页
        2.3 细胞分组第25页
        2.4 细胞计数第25-26页
        2.5 新藤黄酸药液的配制第26页
        2.6 新藤黄酸对黑色素瘤B16细胞药物敏感度的实验(MTT法)第26页
        2.7 倒置显微镜观察新藤黄酸对肿瘤细胞形态的影响第26-27页
        2.8 统计处理方法第27页
    3 实验结果第27-28页
        3.1 新藤黄酸对黑色素瘤B16细胞增殖作用的影响(MTT法)第27页
        3.2 新藤黄酸对B16细胞形态的影响第27-28页
    4 讨论第28-29页
    5 小结第29-30页
第二部分 新藤黄酸诱导黑色素瘤B16细胞自噬的研究第30-45页
    1 实验材料与仪器第30-32页
        1.1 细胞株第30页
        1.2 药物第30页
        1.3 主要试剂第30页
        1.4 主要试剂的配制第30-31页
        1.5 主要仪器第31-32页
    2 实验方法第32-35页
        2.1 细胞复苏和冻存第32页
            2.1.1 细胞复苏第32页
            2.1.2 细胞冻存第32页
        2.2 细胞培养和传代第32页
        2.3 细胞分组第32-33页
        2.4 细胞计数第33页
        2.5 新藤黄酸药液的配制第33页
        2.6 透射电镜观察新藤黄酸诱导的B16细胞线粒体自噬第33页
        2.7 MDC染色第33-34页
        2.8 流式细胞术实验第34-35页
            2.8.1 细胞线粒体膜电位检测(JC-1)第34页
            2.8.2 细胞内活性氧ROS的检测第34-35页
            2.8.3 MDC染色后流式细胞术检测自噬第35页
        2.9 统计处理方法第35页
    3 实验结果第35-41页
        3.1 透射电镜检测细胞自噬第35-36页
        3.2 MDC染色第36-37页
        3.3 JC-1 探针测定线粒体膜电位第37-38页
        3.4 新藤黄酸对B16细胞内活性氧ROS变化的影响第38-40页
        3.5 MDC染色流式细胞术分析第40-41页
    4 讨论第41-44页
        4.1 自噬与肿瘤及肿瘤治疗的关系的研究第41-42页
        4.2 ROS与细胞自噬的关系第42-44页
        4.3 线粒体膜电位变化与细胞自噬的关系第44页
    5 小结第44-45页
第三部分 新藤黄酸诱导B16细胞自噬的分子机制研究第45-60页
    1 实验材料及仪器第45-49页
        1.1 细胞系及细胞培养第45页
        1.2 药物第45页
        1.3 主要试剂第45-46页
        1.4 主要试剂的配制第46-48页
        1.5 主要仪器第48-49页
    2 实验方法第49-54页
        2.1 细胞复苏和冻存第49页
            2.1.1 细胞复苏第49页
            2.1.2 细胞冻存第49页
        2.2 细胞培养和传代第49页
        2.3 细胞处理第49页
        2.4 蛋白样品制备第49-50页
        2.5 蛋白含量测定第50-51页
        2.6 SDS-PAGE凝胶电泳第51-54页
        2.7 统计处理方法第54页
    3 实验结果第54-56页
        3.1 新藤黄酸对B16细胞LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白表达的影响第54-55页
        3.2 新藤黄酸对B16细胞mTOR,AMPK及 SIRT3蛋白表达的影响第55-56页
    4 讨论第56-59页
        4.1 LC3蛋白与细胞自噬的关系第56-57页
        4.2 AMPK蛋白与细胞线粒体自噬的关系第57-58页
        4.3 mTOR在自噬中作用的研究第58-59页
    5 小结第59-60页
讨论第60-63页
总结第63-65页
参考文献第65-73页
综述 AMPK在细胞线粒体自噬中作用的研究第73-82页
    参考文献第79-82页
附录第82-83页
致谢第83页

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