中文摘要 | 第9-11页 |
Abstract | 第11-13页 |
英文缩略词表(Abbreviation) | 第14-16页 |
前言 | 第16-22页 |
1.研究目的与意义 | 第16-17页 |
2.细胞自噬 | 第17-19页 |
3.细胞自噬的信号调控 | 第19-20页 |
4.细胞自噬与肿瘤的关系 | 第20-22页 |
第一部分 新藤黄酸对黑色素瘤B16细胞增殖的影响 | 第22-30页 |
1 实验材料与仪器 | 第22-24页 |
1.1 细胞株 | 第22页 |
1.2 药物 | 第22页 |
1.3 主要试剂 | 第22页 |
1.4 主要试剂的配制 | 第22-23页 |
1.5 主要仪器 | 第23-24页 |
2 实验方法 | 第24-27页 |
2.1 细胞复苏和冻存 | 第24-25页 |
2.1.1 细胞复苏 | 第24页 |
2.1.2 细胞冻存 | 第24-25页 |
2.2 细胞培养和传代 | 第25页 |
2.3 细胞分组 | 第25页 |
2.4 细胞计数 | 第25-26页 |
2.5 新藤黄酸药液的配制 | 第26页 |
2.6 新藤黄酸对黑色素瘤B16细胞药物敏感度的实验(MTT法) | 第26页 |
2.7 倒置显微镜观察新藤黄酸对肿瘤细胞形态的影响 | 第26-27页 |
2.8 统计处理方法 | 第27页 |
3 实验结果 | 第27-28页 |
3.1 新藤黄酸对黑色素瘤B16细胞增殖作用的影响(MTT法) | 第27页 |
3.2 新藤黄酸对B16细胞形态的影响 | 第27-28页 |
4 讨论 | 第28-29页 |
5 小结 | 第29-30页 |
第二部分 新藤黄酸诱导黑色素瘤B16细胞自噬的研究 | 第30-45页 |
1 实验材料与仪器 | 第30-32页 |
1.1 细胞株 | 第30页 |
1.2 药物 | 第30页 |
1.3 主要试剂 | 第30页 |
1.4 主要试剂的配制 | 第30-31页 |
1.5 主要仪器 | 第31-32页 |
2 实验方法 | 第32-35页 |
2.1 细胞复苏和冻存 | 第32页 |
2.1.1 细胞复苏 | 第32页 |
2.1.2 细胞冻存 | 第32页 |
2.2 细胞培养和传代 | 第32页 |
2.3 细胞分组 | 第32-33页 |
2.4 细胞计数 | 第33页 |
2.5 新藤黄酸药液的配制 | 第33页 |
2.6 透射电镜观察新藤黄酸诱导的B16细胞线粒体自噬 | 第33页 |
2.7 MDC染色 | 第33-34页 |
2.8 流式细胞术实验 | 第34-35页 |
2.8.1 细胞线粒体膜电位检测(JC-1) | 第34页 |
2.8.2 细胞内活性氧ROS的检测 | 第34-35页 |
2.8.3 MDC染色后流式细胞术检测自噬 | 第35页 |
2.9 统计处理方法 | 第35页 |
3 实验结果 | 第35-41页 |
3.1 透射电镜检测细胞自噬 | 第35-36页 |
3.2 MDC染色 | 第36-37页 |
3.3 JC-1 探针测定线粒体膜电位 | 第37-38页 |
3.4 新藤黄酸对B16细胞内活性氧ROS变化的影响 | 第38-40页 |
3.5 MDC染色流式细胞术分析 | 第40-41页 |
4 讨论 | 第41-44页 |
4.1 自噬与肿瘤及肿瘤治疗的关系的研究 | 第41-42页 |
4.2 ROS与细胞自噬的关系 | 第42-44页 |
4.3 线粒体膜电位变化与细胞自噬的关系 | 第44页 |
5 小结 | 第44-45页 |
第三部分 新藤黄酸诱导B16细胞自噬的分子机制研究 | 第45-60页 |
1 实验材料及仪器 | 第45-49页 |
1.1 细胞系及细胞培养 | 第45页 |
1.2 药物 | 第45页 |
1.3 主要试剂 | 第45-46页 |
1.4 主要试剂的配制 | 第46-48页 |
1.5 主要仪器 | 第48-49页 |
2 实验方法 | 第49-54页 |
2.1 细胞复苏和冻存 | 第49页 |
2.1.1 细胞复苏 | 第49页 |
2.1.2 细胞冻存 | 第49页 |
2.2 细胞培养和传代 | 第49页 |
2.3 细胞处理 | 第49页 |
2.4 蛋白样品制备 | 第49-50页 |
2.5 蛋白含量测定 | 第50-51页 |
2.6 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第51-54页 |
2.7 统计处理方法 | 第54页 |
3 实验结果 | 第54-56页 |
3.1 新藤黄酸对B16细胞LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白表达的影响 | 第54-55页 |
3.2 新藤黄酸对B16细胞mTOR,AMPK及 SIRT3蛋白表达的影响 | 第55-56页 |
4 讨论 | 第56-59页 |
4.1 LC3蛋白与细胞自噬的关系 | 第56-57页 |
4.2 AMPK蛋白与细胞线粒体自噬的关系 | 第57-58页 |
4.3 mTOR在自噬中作用的研究 | 第58-59页 |
5 小结 | 第59-60页 |
讨论 | 第60-63页 |
总结 | 第63-65页 |
参考文献 | 第65-73页 |
综述 AMPK在细胞线粒体自噬中作用的研究 | 第73-82页 |
参考文献 | 第79-82页 |
附录 | 第82-83页 |
致谢 | 第83页 |