| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 1 绪论 | 第12-18页 |
| 1.1 TGEV病原学研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.1 TGEV生物学性状 | 第12-13页 |
| 1.1.2 TGEV基因组 | 第13-14页 |
| 1.1.3 TGEV基因编码蛋白 | 第14-16页 |
| 1.2 TGE的实验室诊断 | 第16-17页 |
| 1.2.1 TGEV抗原检测 | 第16-17页 |
| 1.2.2 血清学诊断 | 第17页 |
| 1.3 研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 TGEV S蛋白C抗原位点的原核表达 | 第18-26页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第18-20页 |
| 2.2.1 质粒与菌种 | 第18-19页 |
| 2.2.2 主要分子生物学试剂 | 第19页 |
| 2.2.3 主要生化试剂 | 第19页 |
| 2.2.5 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-24页 |
| 2.3.1 含有抗原位点C的核苷酸链的设计与合成 | 第20页 |
| 2.3.2 含有抗原位点C的核苷酸链的退火 | 第20页 |
| 2.3.3 带有粘性末端的表达载体p ET-32a的制备 | 第20-21页 |
| 2.3.4 目的片段与表达载体p ET-32a的连接 | 第21页 |
| 2.3.5 DH5α 和Rosetta（DE3）感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
| 2.3.6 连接产物的转化 | 第22页 |
| 2.3.7 重组质粒p ET32a-C1C2的鉴定 | 第22-23页 |
| 2.3.8 重组蛋白的诱导 | 第23页 |
| 2.3.9 重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第23-24页 |
| 2.4 结果与分析 | 第24-25页 |
| 2.4.1 重组质粒p ET-32a-C1C2鉴定 | 第24页 |
| 2.4.2 含有C抗原位点片段的重组蛋白的表达 | 第24-25页 |
| 2.5 本章小结 | 第25-26页 |
| 3 TGEV S蛋白D抗原位点的原核表达 | 第26-33页 |
| 3.1 引言 | 第26页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第26-27页 |
| 3.2.1 质粒与菌种 | 第26页 |
| 3.2.2 主要分子生物学试剂 | 第26页 |
| 3.2.3 主要生化试剂 | 第26页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第26-27页 |
| 3.3 实验方法 | 第27-30页 |
| 3.3.1 含有抗原位点D的核苷酸链的设计与合成 | 第27-28页 |
| 3.3.2 含有抗原位点D的核苷酸链的退火 | 第28页 |
| 3.3.3 带有粘性末端的表达载体p ET-32a的制备 | 第28页 |
| 3.3.4 目的片段与表达载体p ET-32a的连接 | 第28-29页 |
| 3.3.5 连接产物的转化 | 第29页 |
| 3.3.6 重组质粒p ET32a-D的鉴定 | 第29-30页 |
| 3.3.7 重组蛋白的诱导 | 第30页 |
| 3.3.8 重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第30页 |
| 3.4 结果与分析 | 第30-32页 |
| 3.4.1 重组质粒p ET-32a-D的鉴定 | 第30-31页 |
| 3.4.2 含有D抗原位点片段的重组蛋白的表达 | 第31-32页 |
| 3.5 本章小结 | 第32-33页 |
| 4 TGEV S蛋白C、D抗原位点的串联表达 | 第33-40页 |
| 4.1 引言 | 第33页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第33-34页 |
| 4.2.1 质粒与菌种 | 第33页 |
| 4.2.2 主要分子生物学试剂 | 第33页 |
| 4.2.3 主要生化试剂 | 第33页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第33-34页 |
| 4.3 实验方法 | 第34-37页 |
| 4.3.1 含有抗原位点 D 的核苷酸链的设计与合成 | 第34-35页 |
| 4.3.2 含有抗原位点 D 的核苷酸链的退火 | 第35页 |
| 4.3.3 带有粘性末端的表达载体pET-32a-C_1C_2的制备 | 第35页 |
| 4.3.4 D抗原片段与表达载体pET-32a-C_1C_2的连接 | 第35-36页 |
| 4.3.5 连接产物的转化 | 第36页 |
| 4.3.6 重组质粒pET32a-C_1C_2D 的鉴定 | 第36-37页 |
| 4.4 结果与分析 | 第37-39页 |
| 4.4.1 重组质粒p ET-32a-C1C2D鉴定 | 第37-38页 |
| 4.4.2 含有C和D抗原位点片段的重组蛋白的表达 | 第38-39页 |
| 4.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 5 重组蛋白的抗原性分析及表达条件的初步优化 | 第40-50页 |
| 5.1 引言 | 第40页 |
| 5.2 实验材料与仪器 | 第40-41页 |
| 5.2.1 菌种 | 第40页 |
| 5.2.2 酶和抗体 | 第40页 |
| 5.2.3 主要生化试剂 | 第40页 |
| 5.2.4 主要仪器 | 第40-41页 |
| 5.3 实验方法 | 第41-43页 |
| 5.3.1 重组蛋白的诱导 | 第41页 |
| 5.3.2 重组蛋白的纯化及浓度测定 | 第41-42页 |
| 5.3.3 抗Trx单克隆抗体鉴定重组蛋白 | 第42页 |
| 5.3.4 重组蛋白的抗原性检测 | 第42页 |
| 5.3.5 重组蛋白表达条件的初步优化 | 第42-43页 |
| 5.4 结果与分析 | 第43-48页 |
| 5.4.1 重组蛋白的纯化 | 第43页 |
| 5.4.2 重组蛋白的鉴定 | 第43-44页 |
| 5.4.3 重组蛋白的抗原性检测 | 第44-45页 |
| 5.4.4 重组蛋白表达条件的初步优化 | 第45-48页 |
| 5.5 本章小结 | 第48-50页 |
| 6 讨论 | 第50-52页 |
| 6.1 重组蛋白表达条件的优化 | 第50页 |
| 6.2 表位重组蛋白连接物（linker）的选择 | 第50-51页 |
| 6.3 表位的选择 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 附录 | 第60-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
