| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第9-14页 |
| 1.1 植物病毒的危害及防治 | 第10-11页 |
| 1.2 WRKY转录因子的结构与特征 | 第11页 |
| 1.3 WRKY蛋白参与植物防卫反应 | 第11-13页 |
| 1.3.1 WRKY转录因子的正调控 | 第12页 |
| 1.3.2 WRKY转录因子的负调控 | 第12页 |
| 1.3.3 WRKY转录因子的其他调控方式 | 第12页 |
| 1.3.4 WRKY转录因子在植物抗病信号途径中的功能 | 第12-13页 |
| 1.4 农杆菌介导的植物遗传转化中T-DNA拷贝数的鉴定 | 第13-14页 |
| 2 引言 | 第14-16页 |
| 2.1 研究内容及意义 | 第14页 |
| 2.2 研究路线 | 第14-15页 |
| 2.2.1 NtWRKY40基因的克隆及功能的验证 | 第14-15页 |
| 2.2.2 实时荧光定量PCR方法鉴定转基因植物中T-DNA串联重复序列的拷贝数 | 第15页 |
| 2.3 研究内容 | 第15-16页 |
| 3 材料和方法 | 第16-21页 |
| 3.1 实验材料 | 第16-17页 |
| 3.2 培养基及药品母液制备 | 第17页 |
| 3.3 实验室试剂 | 第17页 |
| 3.4 主要仪器 | 第17页 |
| 3.5 试验方法 | 第17-20页 |
| 3.5.1 引物设计及基因的克隆 | 第17-18页 |
| 3.5.2 质粒构建 | 第18页 |
| 3.5.3 农杆菌转化烟草叶片 | 第18页 |
| 3.5.4 植株DNA的提取和PCR转基因验证 | 第18-19页 |
| 3.5.5 RNA提取及cDNA合成 | 第19页 |
| 3.5.6 基因表达的定量分析 | 第19页 |
| 3.5.7 植株的扩繁 | 第19页 |
| 3.5.8 转基因植株的移栽和病毒的侵染 | 第19-20页 |
| 3.6 DNA提取和T-DNA插入的Southern blot分析 | 第20页 |
| 3.7 通过PCR检测T-DNA的串联重复 | 第20页 |
| 3.8 质粒的构建 | 第20页 |
| 3.9 使用定量PCR确定转基因拟南芥中拷贝数 | 第20-21页 |
| 3.10 分析T-DNA串联间的接头及序列分析 | 第21页 |
| 4 结果与分析 | 第21-33页 |
| 4.1 过表达载体构建图谱 | 第21-22页 |
| 4.2 RNAi-NtWRKY40质粒的构建 | 第22页 |
| 4.3 过表达转基因烟草的获得 | 第22-24页 |
| 4.3.1 转基因植株的定量分析 | 第23-24页 |
| 4.3.2 植株扩繁 | 第24页 |
| 4.4 NtWRKY40过表达植株的抗病分析 | 第24-28页 |
| 4.4.1 NtWRKY40过表达植株对TMV侵染表现为敏感性 | 第24-25页 |
| 4.4.2 病毒侵染后，不同时间段相关基因的表达 | 第25-27页 |
| 4.4.3 line5病毒侵染18天后，表型的观察 | 第27-28页 |
| 4.5 RNAi-NtWRKY40菌液验证及测序 | 第28-29页 |
| 4.6 引物设计 | 第29-30页 |
| 4.7 质粒构建图谱 | 第30页 |
| 4.8 在拟南芥SK株系中T-DNA串联的出现和拷贝数分析 | 第30-32页 |
| 4.9 定量PCR方法准确性的验证 | 第32-33页 |
| 5 T-DNA串联重复结构及填充序列 | 第33-35页 |
| 5.1 含有左右边界（LB+RB）的串联重复 | 第33-34页 |
| 5.2 只含有RB边界的串联重复 | 第34-35页 |
| 6 讨论 | 第35-39页 |
| 6.1 烟草NtWRKY40基因在植物病毒防御信号中的作用 | 第35-37页 |
| 6.2 实时荧光定量PCR方法鉴定转基因植物中T-DNA串联重复序列的拷贝数 | 第37-39页 |
| 7 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-47页 |
| 附录 英文缩写及注释 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 作者简介 | 第49页 |
