| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 中英文缩写词表 | 第8-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-28页 |
| 1.1 脂肪酶研究概况 | 第13-21页 |
| 1.1.1 脂肪酶的来源与分布 | 第13-14页 |
| 1.1.2 脂肪酶的结构和生物学特点 | 第14-16页 |
| 1.1.3 脂肪酶的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.1.4 脂肪酶在生产中的应用 | 第18-21页 |
| 1.2 胰腺脂肪酶研究进展 | 第21-24页 |
| 1.2.1 胰腺脂肪酶的结构 | 第21-23页 |
| 1.2.2 胰腺脂肪酶的功能 | 第23页 |
| 1.2.3 影响胰腺脂肪酶活性的因素 | 第23-24页 |
| 1.3 巴斯德毕赤酵母表达系统研究概况 | 第24-28页 |
| 1.3.1 巴斯德毕赤酵母表达系统宿主菌 | 第25-26页 |
| 1.3.2 毕赤酵母的表达载体 | 第26-27页 |
| 1.3.3 外源基因在毕赤酵母中的表达 | 第27页 |
| 1.3.4 巴斯德毕赤酵母表达系统的优化 | 第27-28页 |
| 2 本研究的意义、研究目标以及技术路线 | 第28-30页 |
| 2.1 本研究的意义 | 第28-29页 |
| 2.2 本研究的研究目标 | 第29页 |
| 2.3 本研究技术路线 | 第29-30页 |
| 3 材料与方法 | 第30-41页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第30-33页 |
| 3.1.1 菌株及试剂 | 第30页 |
| 3.1.2 试验主要仪器设备 | 第30页 |
| 3.1.3 试验培养基 | 第30-31页 |
| 3.1.4 相关溶液的配置 | 第31-32页 |
| 3.1.5 引物设计 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-41页 |
| 3.2.1 PPL的改造 | 第33页 |
| 3.2.2 表达载体pPICZaA-rePPL的构建 | 第33-36页 |
| 3.2.3 pPICZaA-rePPL在毕赤酵母中的表达与纯化 | 第36-38页 |
| 3.2.4 对转化子进行Real-Time PCR筛选 | 第38页 |
| 3.2.5 用甲醇诱导重组rePPL的表达及纯化 | 第38-39页 |
| 3.2.6 重组rePPL的分子量及浓度测定 | 第39页 |
| 3.2.7 rePPL活性检测 | 第39-40页 |
| 3.2.8 酶的最适反应温度 | 第40-41页 |
| 3.2.9 酶的最适pH | 第41页 |
| 3.2.10 酶的热稳定性 | 第41页 |
| 3.2.11 酶的Km值和Vmax的测定 | 第41页 |
| 3.2.12 金属离子对酶活力的影响 | 第41页 |
| 4 实验结果与分析 | 第41-50页 |
| 4.1 PPL基因的改造 | 第41-44页 |
| 4.2 重组表达载体pPICZaA-rePPL的构建 | 第44-45页 |
| 4.3 毕赤酵母中的pPICZaA-rePPL表达菌体的转化与筛选 | 第45-47页 |
| 4.4 rePPL在巴斯德毕赤酵母中的表达以及纯化 | 第47页 |
| 4.5 纯化重组蛋白的浓度测定 | 第47-48页 |
| 4.6 重组脂肪酶的酶学性质分析 | 第48-50页 |
| 5 讨论 | 第50-53页 |
| 5.1 脂肪酶在毕赤酵母中的表达 | 第50-52页 |
| 5.2 有关脂肪酶活力的测定 | 第52页 |
| 5.3 有关脂肪酶的酶学性质 | 第52-53页 |
| 6 结论与展望 | 第53-54页 |
| 6.1 研究结论 | 第53页 |
| 6.2 展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
