| 摘要 | 第3-5页 |
| Summary | 第5-7页 |
| 外文缩略语表 | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-16页 |
| 1 支原体 | 第11页 |
| 2 牛支原体 | 第11-14页 |
| 2.1 牛支原体肺炎临床症状与病理变化 | 第12-13页 |
| 2.2 抵抗力 | 第13页 |
| 2.3 牛支原体诱导的免疫反应 | 第13页 |
| 2.4 牛支原体致病机制 | 第13-14页 |
| 2.5 牛支原体膜蛋白 | 第14页 |
| 3 免疫沉淀及免疫共沉淀 | 第14页 |
| 4 NADH氧化酶(NADH Oxidase,NOX)研究进展 | 第14-15页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 第二章 牛支原体免疫相关膜蛋白的筛选和鉴定 | 第16-27页 |
| 1 材料 | 第16-17页 |
| 1.1 菌种、实验动物 | 第16页 |
| 1.2 仪器 | 第16页 |
| 1.3 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2 方法 | 第17-19页 |
| 2.1 牛支原体全菌多克隆抗体的制备及多抗血清学效价的测定 | 第17-18页 |
| 2.2 牛支原体抗血清中IgG的纯化、浓缩与效价测定 | 第18页 |
| 2.3 牛支原体膜蛋白的提取 | 第18-19页 |
| 2.4 牛支原体膜蛋白与抗体分子的免疫沉淀 | 第19页 |
| 3 结果 | 第19-25页 |
| 3.1 牛支原体全菌多克隆抗体的制备及多抗血清学效价的测定 | 第19页 |
| 3.2 牛支原体抗血清中IgG的纯化、浓缩与效价测定 | 第19-20页 |
| 3.3 牛支原体膜蛋白的提取 | 第20-21页 |
| 3.4 牛支原体膜蛋白免疫沉淀(IP) | 第21-25页 |
| 4 讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 牛支原体感染相关宿主细胞蛋白的筛选和鉴定 | 第27-32页 |
| 1 材料 | 第27-28页 |
| 1.1 菌种、实验动物 | 第27页 |
| 1.2 仪器 | 第27页 |
| 1.3 试剂 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-29页 |
| 2.1 牛支原体膜蛋白的提取 | 第28页 |
| 2.2 EBL细胞膜蛋白的提取 | 第28页 |
| 2.3 Mb膜蛋白与EBL细胞膜蛋白的免疫共沉淀 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-31页 |
| 3.1 免疫共沉淀SDS-PAGE分析 | 第29页 |
| 3.2 Co-IP结果的质谱分析 | 第29-31页 |
| 4 讨论 | 第31-32页 |
| 第四章 牛支原体NOX-1基因的克隆、表达及亚细胞定位 | 第32-47页 |
| 1 材料 | 第32-34页 |
| 1.1 菌种、载体及试验动物 | 第32页 |
| 1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第32-33页 |
| 1.4 培养基配制 | 第33页 |
| 1.5 试剂配制 | 第33-34页 |
| 2 方法 | 第34-40页 |
| 2.1 引物合成 | 第34页 |
| 2.2 M.bovis基因组的提取 | 第34页 |
| 2.3 NOX-1基因的克隆 | 第34-36页 |
| 2.3.1 PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.3.2 目的基因的回收 | 第35页 |
| 2.3.3 MbNOX-1基因的序列分析 | 第35页 |
| 2.3.4 MbNOX-1基因的优化 | 第35-36页 |
| 2.4 原核表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 2.4.1 NOX-1与p ET-28a(+)的双酶切 | 第36页 |
| 2.4.2 NOX-1与p ET-28a(+)连接 | 第36页 |
| 2.4.3 转化鉴定 | 第36-37页 |
| 2.6 p ET-NOX-1 原核表达及表达产物的纯化 | 第37-38页 |
| 2.6.1 转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞BL21 | 第37-38页 |
| 2.6.2 p ET-NOX-1 原核表达 | 第38页 |
| 2.6.3 目的蛋白纯化 | 第38页 |
| 2.7 His-NOX-1 酶促活性及其影响因素的测定 | 第38-39页 |
| 2.7.1 His-NOX-1 的酶活性测定 | 第38页 |
| 2.7.2 不同温度对His-NOX-1 活性的影响 | 第38-39页 |
| 2.7.3 不同p H对 His-NOX-1 活性的影响 | 第39页 |
| 2.7.4 不同底物浓度对His-NOX-1 活性的影响 | 第39页 |
| 2.8 多克隆抗体的制备及效价的测定 | 第39页 |
| 2.9 胞浆蛋白和膜蛋白的提取 | 第39页 |
| 2.10 His-NOX-1在M.bovis细胞内的分布 | 第39-40页 |
| 2.10.1 Western blot分析 | 第39-40页 |
| 2.10.2 ELISA检测 | 第40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-45页 |
| 3.1 NOX-1基因扩增产物的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2 原核表达载体p ET-NOX-1 的构建 | 第41页 |
| 3.3 NOX-1基因序列相似性分析 | 第41-42页 |
| 3.4 His-NOX-1 原核表达及表达产物的纯化 | 第42页 |
| 3.5 His-NOX-1 酶促反应活性 | 第42-43页 |
| 3.6 温度和 p H 对 His-NOX-1 活性的影响 | 第43页 |
| 3.7 His-NOX-1 的米氏常数及最大反应速率 | 第43-44页 |
| 3.8 血清抗体效价测定 | 第44页 |
| 3.9 His-NOX-1在M.bovis内的分布 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56-57页 |
| 导师简介 | 第57-58页 |
