| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-13页 |
| 2.材料与方法 | 第13-33页 |
| 2.1 实验对象 | 第13页 |
| 2.2 主要仪器 | 第13-14页 |
| 2.3 试剂 | 第14-17页 |
| 2.3.1 主要试剂 | 第14-16页 |
| 2.3.2 实验所用试剂的配置 | 第16-17页 |
| 2.4 实验方法 | 第17-32页 |
| 2.4.1 phb1过表达腺病毒载体的构建 | 第17-20页 |
| 2.4.2 phb1 shRNA腺病毒载体构建流程 | 第20-22页 |
| 2.4.3 C2C12细胞培养体系的建立 | 第22-23页 |
| 2.4.4 腺病毒载体转染C2C12细胞的条件摸索 | 第23-24页 |
| 2.4.5 转染 | 第24页 |
| 2.4.6 phb1高表达载体和RNA干扰载体效果鉴定 | 第24页 |
| 2.4.7 Western blot检测PHB1蛋白表达水平 | 第24-27页 |
| 2.4.8 phb1 RNA干扰载体对靶基因的沉默效应评价 | 第27页 |
| 2.4.9 RT-PCR检测C2C12细胞中PHB1和F0F1-ATP mRNA水平变化 | 第27-29页 |
| 2.4.10 Western blot检测F0F1-ATP酶蛋白表达水平（参考 2.4.7） | 第29页 |
| 2.4.11 C2C12细胞内线粒体复合体Ⅴ活性测定 | 第29-31页 |
| 2.4.12 C2C12细胞内ATP含量测定 | 第31-32页 |
| 2.4.13 Seahores XF24测定C2C12中细胞耗氧率（0CR） | 第32页 |
| 2.4.14 C2C12细胞内活性氧（ROS）测定 | 第32页 |
| 2.5 统计学处理 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-57页 |
| 3.1 phb1过表达腺病毒载体的构建和效果评价 | 第33-34页 |
| 3.1.1 pHBAd-MCMV-GFP- phb1重组载体测序 | 第33-34页 |
| 3.1.2 单克隆PCR鉴定结果 | 第34页 |
| 3.1.3 phb1高表达腺病毒载体感染滴度 | 第34页 |
| 3.2 phb1 shRNA腺病毒载体构建 | 第34-38页 |
| 3.2.1 PHB1-RNAi重组质粒测序结果 | 第34-37页 |
| 3.2.2 phb1 shRNA腺病毒载体感染滴度 | 第37-38页 |
| 3.3 最佳转染条件的摸索 | 第38-42页 |
| 3.3.1 最佳MOI值摸索 | 第38-40页 |
| 3.3.2 最佳转染时间摸索 | 第40-42页 |
| 3.4 PHB1高表达腺病毒载体效果鉴定 | 第42-43页 |
| 3.5 Western blot方法检测phb1 siRNA载体对PHB1基因的沉默效果评价 | 第43-44页 |
| 3.6 腺病毒载体过表达和干扰载体转染C2C12细胞，确定两种载体对细胞内PHB1表达升高和抑制的效果 | 第44-45页 |
| 3.7 外源性的改变C2C12细胞中PHB1的表达，对F_0F_1-ATP酶mRNA水平和蛋白表达水平的影响 | 第45-49页 |
| 3.7.1 干扰表达载体和高表达载体瞬时共转染C2C12细胞，RT-PCR检测PHB1和F_0F_1-ATP酶mRNA水平变化 | 第45-48页 |
| 3.7.2 干扰表达载体和高表达载体瞬时共转染C2C12细胞，对F_0F_1-ATP酶蛋白水平影响 | 第48-49页 |
| 3.8 外源性改变PHB1的表达，对C2C12细胞中复合体V活性（F_0F_1-ATP合成酶活性）的影响 | 第49-51页 |
| 3.8.1 外源性升高PHB1的表达，对C2C12细胞中复合体V活性（F_0F_1-ATP合成酶活性）的影响 | 第49-50页 |
| 3.8.2 外源性升高PHB1的表达，对C2C12细胞中复合体V活性（F_0F_1-ATP合成酶活性）的影响 | 第50-51页 |
| 3.9 外源性改变细胞内PHB1的表达，对ATP含量的影响 | 第51-52页 |
| 3.9.1 外源性升高细胞内PHB1的表达，对ATP含量的影响 | 第51-52页 |
| 3.9.2 外源性降低PHB1的表达，对C2C12细胞中ATP含量的影响 | 第52页 |
| 3.10 外源性改变PHB1的表达，对细胞耗氧率（OCR）变化的影响 | 第52-55页 |
| 3.10.1 外源性升高PHB1表达，对细胞耗氧率（OCR)变化的影响 | 第52-54页 |
| 3.10.2 外源性降低PHB1表达，对细胞耗氧率（OCR）变化影响 | 第54-55页 |
| 3.11 外源性改变细胞中PHB1的表达，对活性氧（ROS）生成的影响 | 第55-57页 |
| 3.11.1 外源性升高细胞中PHB1的表达，对活性氧（ROS）生成的影响 | 第55-56页 |
| 3.11.2 外源性降低PHB1的表达，对C2C12细胞中活性氧（ROS）生成的影响 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-62页 |
| 4.1 腺病毒载体构建及条件摸索 | 第57页 |
| 4.2 PHB1的表达对F_0F_1-ATP酶（ATP合酶）的影响 | 第57-59页 |
| 4.3 PHB1表达对细胞ATP生成及细胞能量代谢的影响 | 第59-61页 |
| 4.4 PHB1的表达对细胞内活性氧（ROS）生成的影响 | 第61-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 综述 | 第71-80页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 附件 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 个人简历 | 第82-83页 |
