| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 第一节 水稻稻瘟研究进展 | 第13-19页 |
| 1 稻瘟病研究的历史 | 第14页 |
| 2 稻瘟病的症状及发病规律 | 第14-15页 |
| 3 稻瘟病菌侵染与为害机理 | 第15页 |
| 4 稻瘟病造成的危害 | 第15页 |
| 5 抗稻瘟病基因研究进展 | 第15-19页 |
| ·稻瘟病抗性基因遗传分析与分子定位 | 第16-17页 |
| ·稻瘟病抗性基因的克隆 | 第17-18页 |
| ·传统图位克隆 | 第17-18页 |
| ·电子图位克隆 | 第18页 |
| ·Pib基因的克隆及研究进展 | 第18-19页 |
| 第二节 水稻遗传转化研究 | 第19-27页 |
| 1 水稻转化受体系统 | 第20-21页 |
| ·原生质体再生系统 | 第20页 |
| ·愈伤组织再生系统 | 第20页 |
| ·幼嫩子房转化系统 | 第20-21页 |
| 2 常用的基因转化方法 | 第21-24页 |
| ·农杆菌介导法(Agrobacterium-mediation) | 第21-22页 |
| ·基因枪转化法(Biolistics) | 第22页 |
| ·聚乙二醇法(PEG,Polyethylene Glycol) | 第22-23页 |
| ·电激法(Elect roporation) | 第23页 |
| ·花粉管通道法(pollen tube-pathway transformation) | 第23页 |
| ·其他方法 | 第23-24页 |
| 3 水稻转化中报告基因的选择 | 第24-25页 |
| 4 植物基因工程存在的问题及展望 | 第25-27页 |
| ·基因沉默 | 第25页 |
| ·外源基因在转基因植物中的最佳表达及其遗传稳定性 | 第25-26页 |
| ·选择标记基因的去除 | 第26页 |
| ·转基因品种与常规品种的安全性 | 第26-27页 |
| 第三节 植物基因内含子的研究 | 第27-30页 |
| 1 植物基因内含子的结构特征 | 第27-28页 |
| 2 内含子对基因表达的调控作用 | 第28-30页 |
| ·内含子对基因表达的正调控作用 | 第28-29页 |
| ·内含子可能具有启动子的功能 | 第28-29页 |
| ·内含子对基因表达的负调控作用 | 第29-30页 |
| ·内含子对基因表达的双向调节作用 | 第30页 |
| 3 内含子突变对基因表达效应的影响 | 第30页 |
| 第四节 本研究的目的和意义 | 第30-33页 |
| 第二章 植物表达载体的构建 | 第33-41页 |
| 1 材料和方法 | 第33-36页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·质粒与菌株 | 第33-34页 |
| ·试剂与试剂盒 | 第34页 |
| ·质粒抽提液 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·CaCl_2法制备大肠肝菌感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·质粒提取 | 第35页 |
| ·酶切产物的回收(参见鼎国产品说明书) | 第35页 |
| ·连接反应与转化 | 第35页 |
| ·根癌农杆菌EHA105感受态的制备和转化 | 第35-36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-41页 |
| ·对双元载体pCAMBIA1381Z的分析 | 第37页 |
| ·Pib基因的酶切位点分析 | 第37页 |
| ·pNAR1101的构建 | 第37-38页 |
| ·pNAR1102的构建 | 第38-39页 |
| ·pNAR1103的构建 | 第39-40页 |
| ·双元载体转化农杆菌EHA105 | 第40-41页 |
| 第三章 农杆菌介导的转基因水稻植株获得 | 第41-49页 |
| 1 材料与方法 | 第41-45页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·转基因受体品种 | 第41页 |
| ·质粒和菌株 | 第41页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-45页 |
| ·水稻愈伤组织的诱导、继代培养和农杆菌转化 | 第42-43页 |
| ·转基因水稻离体叶片潮霉素抗性鉴定 | 第43页 |
| ·水稻基因组DNA的提取 | 第43-44页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第44页 |
| ·水稻叶片总DNA的提取 | 第44-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-49页 |
| ·转基因水稻植株的获得 | 第45-46页 |
| ·转基因水稻叶片的离体抗潮霉素鉴定 | 第46-47页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第47-49页 |
| 第四章 Pib基因启动子内含子缺失的转基因分析 | 第49-55页 |
| 1 材料与方法 | 第49-50页 |
| ·实验材料 | 第49-50页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·缓冲液 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-53页 |
| ·不同长度pib基因启动子转基因植株的GUS活性定量分析 | 第50-51页 |
| ·不同缺失体构建的转基因植株暗诱导前后Gus活性荧光定量分析 | 第51-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 全文总结 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
