摘要 | 第7-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
引言 | 第10-11页 |
文献综述 | 第11-21页 |
1 水稻包穗的研究进展 | 第11-16页 |
1.1 水稻的包穗现象 | 第11-12页 |
1.2 水稻包穗基因的研究现状 | 第12页 |
1.3 水稻矮杆突变体的研究进展 | 第12-14页 |
1.4 磷脂酰丝氨酸合成酶的生物学特性 | 第14-15页 |
1.5 磷脂酰丝氨酸合成酶的研究进展 | 第15-16页 |
2 植物基因功能验证的一般方法 | 第16-21页 |
2.1 功能互补实验 | 第16-17页 |
2.2 RNA干扰 | 第17页 |
2.3 基因的过量表达与RT-PCR | 第17-19页 |
2.4 转基因植株的检测方法 | 第19-21页 |
材料与方法 | 第21-29页 |
1 实验材料 | 第21页 |
1.1 植物材料 | 第21页 |
1.2 本试验所用载体 | 第21页 |
1.3 常用分子生物学试剂 | 第21页 |
2 实验方法 | 第21-29页 |
2.1 生物信息学分析的工具 | 第21-22页 |
2.2 载体构建 | 第22-24页 |
2.2.1 pESP2:GUS表达载体构建 | 第22-23页 |
2.2.2 Ubi:ESP2过量表达载体的构建 | 第23-24页 |
2.2.3 RT-PCR分析转基因植株中ESP2的表达 | 第24页 |
2.3 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第24-26页 |
2.3.1 传统侵染成熟胚愈伤的方法 | 第24-26页 |
2.3.1.1 接种 | 第25页 |
2.3.1.2 掐芽 | 第25页 |
2.3.1.3 继代 | 第25页 |
2.3.1.4 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第25-26页 |
2.3.1.5 抗性愈伤的继代筛选与再生植株 | 第26页 |
2.3.2 培养基 | 第26页 |
2.4 GUS基因的活性检测(组织化学定位法) | 第26-27页 |
2.5 转基因植株的检测 | 第27-29页 |
2.5.1 转基因植株潮霉素引物的PCR检测 | 第27页 |
2.5.2 转基因植株的潮霉素溶液检测 | 第27-29页 |
结果与分析 | 第29-39页 |
1 ESP2基因的生物信息学分析 | 第29-33页 |
1.1 ESP2候选基因编码一种磷脂酰丝氨酸合成酶蛋白 | 第29-30页 |
1.2 ESP2可能是一种膜蛋白 | 第30-31页 |
1.3 ESP2基因启动子的生物信息学分析 | 第31-33页 |
2 pESP2:GUS表达载体构建及遗传转化 | 第33-36页 |
2.1 pESP2:GUS载体的构建 | 第33-34页 |
2.2 pESP2:GUS载体的遗传转化及检测 | 第34-35页 |
2.3 GUS活性检测 | 第35-36页 |
3 ESP2的过量表达载体的构建及遗传转化 | 第36-39页 |
3.1 Ubi:ESP2表达载体的构建 | 第36-37页 |
3.2 Ubi:ESP2表达载体的遗传转化及检测 | 第37-38页 |
3.3 ESP2过量植株表达水平的分析 | 第38-39页 |
讨论 | 第39-41页 |
1 ESP2是一个调节水稻倒一节伸长的关键基因 | 第39页 |
2 ESP2转基因过量植株T_0表型与非转基因植株表型没有明显差异的原因 | 第39-40页 |
3 下一步的工作 | 第40-41页 |
参考文献 | 第41-47页 |
附录 | 第47-62页 |
附录1 本论文所使用的表达载体的结构示意图 | 第47-48页 |
附录2 分子生物学实验中PCR体系的建立 | 第48-50页 |
附录3 本实验所用的其他实验方法 | 第50-53页 |
附录4 本实验所用基本培养基配方 | 第53-57页 |
附录5 GUS活性检测重要溶液 | 第57-58页 |
附录6 ESP2启动子的序列分析 | 第58-61页 |
附录7 缩写词 | 第61-62页 |
致谢 | 第62页 |