| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-17页 |
| 1.1 香蕉和香蕉的主要病害 | 第9页 |
| 1.1.1 香蕉 | 第9页 |
| 1.1.2 香蕉的主要病害 | 第9页 |
| 1.2 香蕉枯萎病的研究进展 | 第9-13页 |
| 1.2.1 香蕉枯萎病的发生及危害 | 第9-10页 |
| 1.2.2 香蕉枯萎病病原菌的生理小种 | 第10-11页 |
| 1.2.3 香蕉枯萎病病原菌的生物学特性 | 第11页 |
| 1.2.4 病原菌的侵染途径及其致病机理 | 第11页 |
| 1.2.5 香蕉枯萎病的发病症状 | 第11-12页 |
| 1.2.6 香蕉枯萎病的防治方法 | 第12-13页 |
| 1.3 丝状真菌的遗传转化研究 | 第13-15页 |
| 1.3.1 研究概况 | 第13-14页 |
| 1.3.2 CaCl_2-PEG(polythylene glycol,聚乙二醇)转化方法 | 第14-15页 |
| 1.4 基因敲除技术简介 | 第15页 |
| 1.4.1 基因敲除的概念 | 第15页 |
| 1.4.2 基因敲除的基本原理 | 第15页 |
| 1.4.3 丝状真菌基因敲除的历史 | 第15页 |
| 1.5 ALS(ACETOLACTATE SYNTHASE,乙酰乳酸合成酶)基因的介绍及研究概况 | 第15-16页 |
| 1.5.1 乙酰乳酸合成酶简介 | 第15-16页 |
| 1.5.2 ALS基因的研究概况 | 第16页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-34页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第17页 |
| 2.2 主要试剂 | 第17-18页 |
| 2.3 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.4 培养基及试剂配方 | 第19-20页 |
| 2.5 提取香蕉枯萎病菌基因组DNA | 第20页 |
| 2.5.1 CTAB法提取Foc4基因组DNA | 第20页 |
| 2.6 提取质粒DNA | 第20-22页 |
| 2.6.1. Omega试剂盒提取质粒DNA | 第21页 |
| 2.6.2 SDS碱裂解法提取质粒DNA | 第21-22页 |
| 2.7 ALS基因的香蕉枯萎病病原菌敲除载体的构建 | 第22-30页 |
| 2.7.1 敲除基因的选定 | 第22页 |
| 2.7.2 设计基因左右臂 | 第22-23页 |
| 2.7.3 克隆基因左右臂 | 第23页 |
| 2.7.4 PCR产物的回收 | 第23-24页 |
| 2.7.5 构建敲除载体 | 第24-30页 |
| 2.7.5.1 片段A连接到载体PCX62上 | 第24-27页 |
| 2.7.5.2 片段A连接到载体PCX62上 | 第27-30页 |
| 2.8 制备原生质体 | 第30页 |
| 2.9 原生质体转化 | 第30页 |
| 2.10 转化子检测 | 第30-32页 |
| 2.10.1 转化子菌落表型观察 | 第31页 |
| 2.10.2 转化子显微观察 | 第31页 |
| 2.10.4 转化子PCR检测 | 第31-32页 |
| 2.10.5 转化子生长曲线的测定 | 第32页 |
| 2.11 转化子对香蕉组培幼苗的致病性实验 | 第32-33页 |
| 2.11.1 转化子孢子悬液的制备 | 第32-33页 |
| 2.11.2 转化子对香蕉组培幼苗的致病性实验 | 第33页 |
| 2.12 转化子与生防芽孢杆菌的拮抗实验 | 第33-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-45页 |
| 3.1 ALS基因敲除载体的构建 | 第34-36页 |
| 3.1.1 ALS基因的克隆 | 第34-35页 |
| 3.1.2 克隆基因左右臂片段 | 第35页 |
| 3.1.3 ALS基因敲除载体A-pCX62-B双酶切验证 | 第35-36页 |
| 3.2 原生质体检测 | 第36页 |
| 3.3 转化子菌落表型观察 | 第36-38页 |
| 3.4 转化子的显微观察 | 第38-39页 |
| 3.5 转化子PCR验证 | 第39-40页 |
| 3.6 阳性转化子生长曲线的测定 | 第40-41页 |
| 3.7 阳性转化子与生防芽孢杆菌的对峙拮抗实验 | 第41-42页 |
| 3.8 阳性转化子对香蕉组培幼苗的致病性实验 | 第42-45页 |
| 4 分析与讨论 | 第45-49页 |
| 4.1 原生质体的制备 | 第45-46页 |
| 4.1.1 制备原生质体材料的选择 | 第45页 |
| 4.1.2 关于裂解液的选配 | 第45页 |
| 4.1.3 关于PEG对转化的作用 | 第45-46页 |
| 4.2 关于敲除载体的构建 | 第46-47页 |
| 4.3 ALS基因的功能初探 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
