| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-29页 |
| 1.1 引言 | 第11-12页 |
| 1.2 醇脱氢酶来源 | 第12-13页 |
| 1.2.1 人和动物来源的醇脱氢酶 | 第12页 |
| 1.2.2 植物来源的醇脱氢酶 | 第12-13页 |
| 1.2.3 微生物来源的醇脱氢酶 | 第13页 |
| 1.3 醇脱氢酶分类 | 第13-14页 |
| 1.4 脱氢酶在合成手性物质中的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.5 脱氢酶酶学性质研究 | 第15-21页 |
| 1.5.1 嗜热脱氢酶酶学性质研究 | 第16-18页 |
| 1.5.2 常温脱氢酶酶学性质 | 第18-20页 |
| 1.5.3 嗜冷脱氢酶酶学性质研究 | 第20-21页 |
| 1.6 本论文的研究背景、内容及意义 | 第21-23页 |
| 参考文献 | 第23-29页 |
| 第二章 荧光假单胞菌短链脱氢酶的克隆表达及酶学性质分析 | 第29-48页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 实验材料 | 第29-31页 |
| 2.2.1 菌种及质粒载体 | 第29-30页 |
| 2.2.2 试剂 | 第30页 |
| 2.2.3 培养基 | 第30页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第30-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-36页 |
| 2.3.1 目的基因的克隆 | 第31-33页 |
| 2.3.1.1 菌种培养 | 第31-32页 |
| 2.3.1.2 引物设计 | 第32页 |
| 2.3.1.3 基因组提取 | 第32页 |
| 2.3.1.4 目的基因pfd的PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.3.1.5 目的基因pfd与pMD-18T simple vector的连接 | 第33页 |
| 2.3.2 重组表达质粒pET-pfd的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.3 重组质粒pET-pfd的表达 | 第34页 |
| 2.3.4 重组酶的纯化 | 第34-35页 |
| 2.3.5 重组酶酶活测定 | 第35页 |
| 2.3.6 重组酶酶学性质 | 第35-36页 |
| 2.3.6.1 底物特异性 | 第35页 |
| 2.3.6.2 pH变化对酶活力的影响 | 第35页 |
| 2.3.6.3 温度变化对酶活力的影响 | 第35页 |
| 2.3.6.4 动力学常数 | 第35-36页 |
| 2.3.6.5 有机溶剂耐受性 | 第36页 |
| 2.3.6.6 金属离子对酶活性的影响 | 第36页 |
| 2.4 结果与分析 | 第36-45页 |
| 2.4.1 短链脱氢酶PFD的基因克隆及分子特征 | 第36-38页 |
| 2.4.2 重组表达质粒pET-pfd的构建 | 第38页 |
| 2.4.3 重组表达质粒pET-pfd的构建 | 第38-40页 |
| 2.4.4 重组酶酶学性质 | 第40-45页 |
| 2.4.4.1 底物特异性 | 第40-41页 |
| 2.4.4.2 最适pH | 第41-42页 |
| 2.4.4.3 最适温度 | 第42-43页 |
| 2.4.4.4 动力学常数 | 第43页 |
| 2.4.4.5 有机溶剂耐受性 | 第43-44页 |
| 2.4.4.6 金属离子对重组PFD活力的影响 | 第44-45页 |
| 2.5 本章小结 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-48页 |
| 第三章 地表地芽孢杆菌短链脱氢酶的克隆表达及酶学性质分析 | 第48-68页 |
| 3.1 引言 | 第48-49页 |
| 3.2 实验材料 | 第49页 |
| 3.2.1 菌种及质粒载体 | 第49页 |
| 3.2.2 试剂 | 第49页 |
| 3.2.3 培养基 | 第49页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-55页 |
| 3.3.1 目的基因的克隆 | 第49-51页 |
| 3.3.1.1 菌种培养 | 第49页 |
| 3.3.1.2 引物设计 | 第49-50页 |
| 3.3.1.3 基因组提取 | 第50页 |
| 3.3.1.4 目的基因gsd的PCR扩增 | 第50-51页 |
| 3.3.1.5 目的基因gsd与pMD-18T simple vector的连接 | 第51页 |
| 3.3.2 重组表达质粒pET-gsd的构建 | 第51-52页 |
| 3.3.3 重组质粒pET-gsd的表达 | 第52页 |
| 3.3.4 上罐发酵 | 第52-53页 |
| 3.3.4.1 种子液培养 | 第52页 |
| 3.3.4.2 5 L发酵罐发酵 | 第52页 |
| 3.3.4.3 重组菌生长曲线测定 | 第52-53页 |
| 3.3.5 重组酶的纯化 | 第53页 |
| 3.3.6 重组酶酶活测定 | 第53页 |
| 3.3.7 重组酶酶学性质 | 第53-55页 |
| 3.3.7.1 底物特异性 | 第53页 |
| 3.3.7.2 pH变化对酶活力的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.7.3 温度变化对酶活力的影响 | 第54页 |
| 3.3.7.4 热稳定性 | 第54页 |
| 3.3.7.5 动力学常数 | 第54页 |
| 3.3.7.6 有机溶剂耐受性 | 第54页 |
| 3.3.7.7 金属离子对酶活性的影响 | 第54-55页 |
| 3.4 结果与分析 | 第55-65页 |
| 3.4.1 短链脱氢酶GSD的基因克隆及分子特征 | 第55-57页 |
| 3.4.2 重组表达质粒pET-gsd的构建 | 第57页 |
| 3.4.3 重组表达质粒pET-gsd的构建 | 第57-58页 |
| 3.4.4 重组菌发酵生长曲线 | 第58-59页 |
| 3.4.5 重组酶酶学性质 | 第59-65页 |
| 3.4.5.1 底物特异性 | 第59-60页 |
| 5.4.5.2 最适pH | 第60-61页 |
| 3.4.5.3 最适温度 | 第61-62页 |
| 3.4.5.4 热稳定性 | 第62-63页 |
| 3.4.5.5 动力学常数 | 第63页 |
| 3.4.5.6 有机溶剂耐受性 | 第63-64页 |
| 3.4.5.7 金属离子对重组GSD活力的影响 | 第64-65页 |
| 3.5 本章小结 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-68页 |
| 第四章 铜绿假单胞菌短链脱氢酶的克隆表达 | 第68-78页 |
| 4.1 引言 | 第68-69页 |
| 4.2 实验材料 | 第69页 |
| 4.2.1 菌种及质粒载体 | 第69页 |
| 4.2.2 试剂 | 第69页 |
| 4.2.3 培养基 | 第69页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第69页 |
| 4.3 实验方法 | 第69-72页 |
| 4.3.1 目的基因的克隆 | 第69-71页 |
| 4.3.1.1 菌种培养 | 第69-70页 |
| 4.3.1.2 引物设计 | 第70页 |
| 4.3.1.3 基因组提取 | 第70页 |
| 4.3.1.4 目的基因pad的PCR扩增 | 第70-71页 |
| 4.3.1.5 目的基因pad与pMD-18T simple vector的连接 | 第71页 |
| 4.3.2 重组表达质粒pET-pad的构建 | 第71-72页 |
| 4.4 结果与分析 | 第72-75页 |
| 4.4.1 短链脱氢酶PAD的基因克隆及分子特征 | 第72-74页 |
| 4.4.2 重组表达质粒pET-pad的构建 | 第74-75页 |
| 4.5 本章小结 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-78页 |
| 第五章 总结与展望 | 第78-81页 |
| 5.1 结论 | 第78-79页 |
| 5.2 展望 | 第79-81页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
