| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-21页 |
| 1.1 ASGV（Apple stem grooving virus，ASGV）的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.1 ASGV的分类地位和生物学特性 | 第14页 |
| 1.1.2 ASGV的生物学特性 | 第14页 |
| 1.1.3 ASGV的分子生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.1.4 ASGV的致病机理 | 第15-16页 |
| 1.2 果树病毒脱除研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.1 茎尖培养脱毒 | 第16页 |
| 1.2.2 热处理脱毒 | 第16页 |
| 1.2.3 热处理结合组织培养脱毒 | 第16-17页 |
| 1.2.4 高温诱发基因沉默脱除病毒 | 第17-18页 |
| 1.3 侵染性克隆技术 | 第18-19页 |
| 1.3.1 侵染性克隆技术 | 第18页 |
| 1.3.2 RNA病毒的cDNA侵染性克隆的构建策略 | 第18-19页 |
| 1.4 选题的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 热处理对感染ASGV的砂梨离体组织基因表达的影响 | 第21-34页 |
| 2.1 研究材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 供试植株材料 | 第21页 |
| 2.1.2 研究所用试剂 | 第21-22页 |
| 2.2 研究方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 RNA-seq文库构建 | 第22页 |
| 2.2.2 转录测序结果分析 | 第22-24页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第24-25页 |
| 2.2.4 植物总RNA提取 | 第25页 |
| 2.2.5 总RNA的DNA消化 | 第25页 |
| 2.2.6 cDNA合成 | 第25页 |
| 2.2.7 qRT-PCR扩增 | 第25页 |
| 2.2.8 qRT-PCR数据分析 | 第25-26页 |
| 2.3 结果和分析 | 第26-32页 |
| 2.3.1 热处理条件下感染ASGV的砂梨组培苗茎尖部位差异表达基因的筛选 | 第26页 |
| 2.3.2 差异表达基因功能分类 | 第26-28页 |
| 2.3.3 差异表达基因的GO功能分析和KEGG代谢通路分析 | 第28-30页 |
| 2.3.4 qPCR验证热处理条件下砂梨差异表达基因转录组测序结果并分析其在砂梨茎尖和基部的表达模式 | 第30-31页 |
| 2.3.5 热处理对梨离体植株不同部位ASGV基因表达量的影响 | 第31-32页 |
| 2.3.6 热处理条件下感染ASGV的砂梨Pp899基因表达量分析 | 第32页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 热处理条件下参与沉默途径相关的砂梨基因的克隆及其表达量分析 | 第34-45页 |
| 3.1 研究材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 材料来源 | 第34页 |
| 3.1.2 载体和菌株 | 第34页 |
| 3.1.3 研究所用试剂 | 第34-35页 |
| 3.2 研究方法 | 第35-39页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第35-36页 |
| 3.2.2 植物DNA提取 | 第36页 |
| 3.2.3 PCR扩增 | 第36-37页 |
| 3.2.4 PCR产物的回收、克隆及测序 | 第37页 |
| 3.2.5 结果分析所用软件 | 第37页 |
| 3.2.6 qRT-PCR | 第37页 |
| 3.2.7 沉默载体构建 | 第37-38页 |
| 3.2.8 农杆菌感受态的制备和转化 | 第38页 |
| 3.2.9 农杆菌接种方法 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-44页 |
| 3.3.1 砂梨沉默相关基因PCR产物电泳检测结果 | 第39-40页 |
| 3.3.2 砂梨沉默相关基因氨基酸水平系统发育树分析 | 第40-41页 |
| 3.3.3 热处理条件下触发梨寄主茎尖部位基因沉默途径的关键基因的表达量分析 | 第41-42页 |
| 3.3.4 基因沉默途径中关键基因功能初步验证 | 第42-44页 |
| 3.4 小结和讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 ASGV-Js2分离物全基因组侵染性克隆构建及验证 | 第45-53页 |
| 4.1 研究材料 | 第45-46页 |
| 4.1.1 指示植物、菌种和质粒 | 第45页 |
| 4.1.2 研究所用试剂 | 第45-46页 |
| 4.2 研究方法 | 第46-50页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第46页 |
| 4.2.2 ASGV-Js2分离物全基因组序列拼接 | 第46-48页 |
| 4.2.3 侵染性克隆构建 | 第48-50页 |
| 4.3 结果与分析 | 第50-52页 |
| 4.3.1 ASGV-Js2侵染性克隆构建与鉴定 | 第50页 |
| 4.3.2 侵染性克隆验证 | 第50-52页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 全文结论和展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 附录 常用试剂和配方 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 附件 | 第62页 |
