| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略语表 | 第9-16页 |
| 前言 | 第16-22页 |
| 第一章 USF1在黑色素瘤细胞中的表达情况 | 第22-36页 |
| 引言 | 第22页 |
| 实验材料 | 第22-27页 |
| 1.1 细胞株来源 | 第22-23页 |
| 1.2 实验主要试剂 | 第23-24页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第24页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第24-27页 |
| 实验方法 | 第27-32页 |
| 2.1 正常人黑素细胞株PIG1细胞、黑色素瘤细胞株 1205-Lu、DO4、WM3211和WM278细胞的培养与传代、冻存与复苏 | 第27-28页 |
| 2.2 实时定量PCR检测USF1表达 | 第28-30页 |
| 2.3 western-blot | 第30-32页 |
| 2.3.1 细胞总蛋白提取 | 第30页 |
| 2.3.2 蛋白的含量测定 | 第30-31页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE电泳 | 第31页 |
| 2.3.4 转膜与免疫反应 | 第31-32页 |
| 2.4 统计学分析 | 第32页 |
| 实验结果 | 第32-35页 |
| 3.1 qRT-PCR检测USF1在PIG1、1205-Lu、DO4、WM3211和WM278细胞中的表达 | 第32-33页 |
| 3.2 Western检测USF1在PIG1、1205-Lu、DO4、WM3211和WM278细胞中的表达 | 第33-35页 |
| 讨论 | 第35-36页 |
| 第二章 USF1对黑色素瘤细胞发生发展的影响 | 第36-48页 |
| 引言 | 第36-37页 |
| 实验材料 | 第37-40页 |
| 1.1 细胞株来源 | 第37页 |
| 1.2 实验主要试剂 | 第37-38页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第38页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第38-40页 |
| 实验方法 | 第40-44页 |
| 2.1 黑色素细胞株 1205-Lu细胞的培养与传代与复苏 | 第40-41页 |
| 2.2 慢病毒载体构建 | 第41-43页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第41页 |
| 2.2.2 Gateway重组载体构建慢病毒载体 | 第41-42页 |
| 2.2.3 LR重组 | 第42页 |
| 2.2.4 慢病毒颗粒包装 | 第42-43页 |
| 2.2.5 慢病毒活性滴度测定 | 第43页 |
| 2.3 慢病毒转染 | 第43页 |
| 2.3.1 MOI值测定实验 | 第43页 |
| 2.3.2 慢病毒感染 | 第43页 |
| 2.4 1205-Lu细胞的迁移实验 | 第43-44页 |
| 实验结果 | 第44-46页 |
| 3.1 转染USF1对 1205-Lu细胞形态学的影响 | 第44-45页 |
| 3.2 转染USF1对 1205-Lu细胞迁移的影响 | 第45-46页 |
| 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 USF1对黑色素瘤细胞发生发展的作用机制 | 第48-105页 |
| 第一节 USF1对黑色素瘤细胞中EMT表达的影响 | 第48-66页 |
| 引言 | 第48-50页 |
| 实验材料 | 第50-54页 |
| 1.1 细胞株来源 | 第50页 |
| 1.2 实验主要试剂 | 第50-51页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第51-52页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第52-54页 |
| 实验方法 | 第54-62页 |
| 2.1 黑色素细胞株 1205-Lu细胞的培养与传代与复苏 | 第54-55页 |
| 2.1.1 1205-Lu细胞复苏 | 第54页 |
| 2.1.2 1205-Lu细胞的培养 | 第54页 |
| 2.1.3 1205-Lu细胞的传代： | 第54-55页 |
| 2.2 慢病毒载体构建 | 第55-57页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第55页 |
| 2.2.2 Gateway重组载体构建慢病毒载体 | 第55-56页 |
| 2.2.3 LR重组 | 第56页 |
| 2.2.4 慢病毒颗粒包装 | 第56-57页 |
| 2.2.5 慢病毒活性滴度测定 | 第57页 |
| 2.3 慢病毒转染 | 第57页 |
| 2.3.1 MOI值测定实验 | 第57页 |
| 2.3.2 慢病毒感染 | 第57页 |
| 2.4 实时定量PCR | 第57-59页 |
| 2.5 western-blot | 第59-61页 |
| 2.5.1 细胞总蛋白提取 | 第59-60页 |
| 2.5.2 蛋白的含量测定 | 第60页 |
| 2.5.3 SDS-PAGE电泳 | 第60-61页 |
| 2.5.4 转膜与免疫反应 | 第61页 |
| 2.6 统计学分析 | 第61-62页 |
| 实验结果 | 第62-65页 |
| 3.1 qRT-PCR检测转染USF1对 1205-Lu细胞E-cad、α-SMA、Vi和FN表达的影响 | 第62-63页 |
| 3.2 Western检测转染USF1对 1205-Lu细胞E-cad、α-SMA、Vi和FN表达的影响 | 第63-65页 |
| 讨论 | 第65-66页 |
| 第二节 沉默或过表达USF1对黑色素瘤细胞中TGFβ信号通路的影响 | 第66-88页 |
| 引言 | 第66-68页 |
| 实验材料 | 第68-72页 |
| 1.1 细胞株来源 | 第68页 |
| 1.2 实验主要试剂 | 第68-69页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第69-70页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第70-72页 |
| 实验方法 | 第72-80页 |
| 2.1 黑色素细胞株 1205-Lu细胞的培养与传代与复苏 | 第72-73页 |
| 2.2 慢病毒载体构建 | 第73-75页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第73页 |
| 2.2.2 Gateway重组载体构建慢病毒载体 | 第73-74页 |
| 2.2.3 LR重组 | 第74页 |
| 2.2.4 慢病毒颗粒包装 | 第74-75页 |
| 2.2.5 慢病毒活性滴度测定 | 第75页 |
| 2.3 慢病毒转染 | 第75-76页 |
| 2.3.1 MOI值测定实验 | 第75页 |
| 2.3.2 慢病毒感染 | 第75-76页 |
| 2.4 实时定量PCR | 第76-77页 |
| 2.5 western-blot | 第77-79页 |
| 2.5.1 细胞总蛋白提取 | 第77-78页 |
| 2.5.2 蛋白的含量测定 | 第78页 |
| 2.5.3 SDS-PAGE电泳 | 第78页 |
| 2.5.4 转膜与免疫反应 | 第78-79页 |
| 2.6 统计学分析 | 第79-80页 |
| 实验结果 | 第80-86页 |
| 3.1 转染USF1对 1205-Lu细胞TGF-β、Smad2和α-SMA表达的影响65 | 第80-82页 |
| 3.2 沉默USF1对 1205-Lu细胞TGF-β、Smad2和 α-SMA表达的影响67讨论 | 第82-86页 |
| 讨论 | 第86-88页 |
| 第三节 沉默USF1对黑色素瘤细胞中TGFβ诱导的EMT表达的影响 | 第88-105页 |
| 引言 | 第88-89页 |
| 实验材料 | 第89-93页 |
| 1.1 细胞株来源 | 第89页 |
| 1.2 实验主要试剂 | 第89-90页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第90-91页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第91-93页 |
| 实验方法 | 第93-99页 |
| 2.1 黑色素细胞株 1205-Lu细胞的培养与传代与复苏 | 第93-94页 |
| 2.2 慢病毒载体构建 | 第94-96页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第94页 |
| 2.2.2 Gateway重组载体构建慢病毒载体 | 第94-95页 |
| 2.2.3 LR重组 | 第95页 |
| 2.2.4 慢病毒颗粒包装 | 第95-96页 |
| 2.2.5 慢病毒活性滴度测定 | 第96页 |
| 2.3 慢病毒转染 | 第96页 |
| 2.3.1 MOI值测定实验 | 第96页 |
| 2.3.2 慢病毒感染 | 第96页 |
| 2.4 细胞总蛋白提取 | 第96-97页 |
| 2.5 蛋白的含量测定 | 第97页 |
| 2.6 SDS-PAGE电泳 | 第97-98页 |
| 2.7 转膜与免疫反应 | 第98页 |
| 2.8 统计学分析 | 第98-99页 |
| 实验结果 | 第99-103页 |
| 3.1 沉默USF1对黑色素瘤细胞中TGFβ诱导的Smad2、E-cad、α-SMA、Vi和FN表达的影响 | 第99-101页 |
| 3.2 沉默USF1对TGFβ诱导后黑色素瘤细胞中细胞形态学的影响 | 第101-103页 |
| 讨论 | 第103-105页 |
| 全文总结 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-118页 |
| 文献综述 TGF-β在肿瘤中的作用研究进展 | 第118-128页 |
| 参考文献 | 第123-128页 |
| 个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第128-130页 |
| 致谢 | 第130页 |
