| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征 ( PRRS ) 概述 | 第11-13页 |
| 1.1.1 PRRS的流行病学 | 第11页 |
| 1.1.2 PRRS的病原学 | 第11-12页 |
| 1.1.3 PRRS的基因组 | 第12页 |
| 1.1.4 PRRSV GP4蛋白 | 第12-13页 |
| 1.1.5 GP4在PRRS新型疫苗研制中的作用 | 第13页 |
| 1.2 抗原表位的研究和应用 | 第13-16页 |
| 1.2.1 抗原表位的概述 | 第13-14页 |
| 1.2.2 T细胞抗原表位的研究手段 | 第14页 |
| 1.2.3 B细胞抗原表位的研究手段 | 第14-15页 |
| 1.2.4 表位疫苗的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.5 PRRSV GP4表位的研究进展 | 第16页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-29页 |
| 2.1 材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 菌株、载体与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 细胞与病毒 | 第17页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第17页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.5 标准参照物 | 第18页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-29页 |
| 2.2.1 PRRSV GP4基因亚克隆及原核表达 | 第19-22页 |
| 2.2.2 PRRSV GP4蛋白单克隆抗体制备 | 第22-24页 |
| 2.2.3 PRRSV GP4蛋白单克隆抗体的特性鉴定 | 第24-26页 |
| 2.2.4 应用噬菌体展示技术筛选PRRSV GP4蛋白抗原表位 | 第26-29页 |
| 3 结果 | 第29-42页 |
| 3.1 PRRSV GP4基因重组表达质粒的构建和鉴定 | 第29页 |
| 3.2 PRRSV GP4蛋白的诱导表达及纯化 | 第29-31页 |
| 3.2.1 PRRSV GP4蛋白的诱导表达 | 第29-30页 |
| 3.2.2 PRRSV GP4蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| 3.3 PRRSV GP4蛋白单克隆抗体制备及特性鉴定 | 第31-38页 |
| 3.3.1 免疫Balb/C小鼠血清抗体效价测定 | 第31页 |
| 3.3.2 最佳抗原抗体工作浓度的确定 | 第31页 |
| 3.3.3 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第31-32页 |
| 3.3.4 杂交瘤细胞培养上清效价的测定 | 第32-33页 |
| 3.3.5 单克隆抗体亚类鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3.6 单抗腹水制备与纯化 | 第34页 |
| 3.3.7 单抗腹水效价的测定 | 第34-35页 |
| 3.3.8 间接免疫荧光方法鉴定单克隆抗体与PRRSV的反应性 | 第35-36页 |
| 3.3.9 免疫印迹方法鉴定单克隆抗体与GP4蛋白的反应性 | 第36-37页 |
| 3.3.10 单克隆抗体特异性分析 | 第37-38页 |
| 3.4 PRRSV GP4蛋白抗原表位的筛选 | 第38-42页 |
| 3.4.1 噬菌体筛选与扩增 | 第38页 |
| 3.4.2 亲和能力检测与测序 | 第38-41页 |
| 3.4.3 竞争性阻断实验 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| 4.1 目的基因的选择 | 第42页 |
| 4.2 免疫抗原和筛选抗原的选择 | 第42-43页 |
| 4.3 动物免疫与细胞融合 | 第43页 |
| 4.4 抗GP4蛋白单克隆抗体 5F12的特性分析 | 第43-44页 |
| 4.5 噬菌体展示技术筛选PRRSV GP4蛋白抗原表位 | 第44-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第54页 |
