| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略符号说明 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-44页 |
| 1.1 氧化应激 | 第17-19页 |
| 1.2 亚硝基化蛋白质的生理功能 | 第19-23页 |
| 1.2.1 酶活性 | 第19-20页 |
| 1.2.2 膜受体和离子通道 | 第20-21页 |
| 1.2.3 转录因子 | 第21-22页 |
| 1.2.4 金属蛋白 | 第22-23页 |
| 1.3 亚硝基化蛋白质与疾病 | 第23-25页 |
| 1.4 蛋白质的分析技术 | 第25-35页 |
| 1.4.1 蛋白质的提取 | 第25-26页 |
| 1.4.1.1 机械法 | 第25-26页 |
| 1.4.1.2 非机械法 | 第26页 |
| 1.4.2 蛋白质浓度测定 | 第26-27页 |
| 1.4.2.1 紫外分光光度法 | 第26页 |
| 1.4.2.2 Bradford法 | 第26-27页 |
| 1.4.2.3 双缩脲法 | 第27页 |
| 1.4.2.4 Lowry法 | 第27页 |
| 1.4.2.5 BCA法 | 第27页 |
| 1.4.3 蛋白质组的分析方法 | 第27-33页 |
| 1.4.3.1 二维凝胶电泳 | 第28-29页 |
| 1.4.3.2 质谱 | 第29-33页 |
| 1.4.4 蛋白质的其他分析技术 | 第33-35页 |
| 1.4.4.1 毛细管电泳 | 第33页 |
| 1.4.4.2 离子交换色谱 | 第33-34页 |
| 1.4.4.3 凝胶过滤色谱 | 第34页 |
| 1.4.4.4 亲和色谱 | 第34-35页 |
| 1.5 硝基化修饰的分析方法 | 第35-40页 |
| 1.5.1 化学发光法 | 第36页 |
| 1.5.2 Saville assay | 第36页 |
| 1.5.3 生物素转化方法 | 第36-38页 |
| 1.5.4 SNOSID | 第38-39页 |
| 1.5.5 组氨酸标签转化法 | 第39页 |
| 1.5.6 二维差异凝胶电泳 | 第39页 |
| 1.5.7 质谱直接分析 | 第39-40页 |
| 1.6 本课题研究内容 | 第40-42页 |
| 1.7 本课题创新点和研究意义 | 第42-44页 |
| 第二章 亚硝基化蛋白组学研究方法的建立 | 第44-72页 |
| 2.1 引言 | 第44-45页 |
| 2.2 实验仪器与材料 | 第45-47页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第45-46页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第46-47页 |
| 2.3 实验方法 | 第47-56页 |
| 2.3.1 肽标记和纯化 | 第47-50页 |
| 2.3.1.1 肽标记 | 第47-48页 |
| 2.3.1.2 标记肽的纯化 | 第48-49页 |
| 2.3.1.3 样品除盐 | 第49页 |
| 2.3.1.4 LC-MS分析 | 第49-50页 |
| 2.3.2 蛋白质的生物素标记 | 第50-54页 |
| 2.3.2.1 BSA的标记 | 第50页 |
| 2.3.2.2 BSA的质谱分析 | 第50-51页 |
| 2.3.2.3 标记BSA的酶解 | 第51-52页 |
| 2.3.2.4 标记BSA酶解产物的LC-MS分析 | 第52-53页 |
| 2.3.2.5 SDS-PAGE | 第53页 |
| 2.3.2.6 标记BSA的胶内酶解 | 第53-54页 |
| 2.3.3 人血浆蛋白的亚硝基化方法 | 第54-56页 |
| 2.3.3.1 人血浆样品的处理 | 第54页 |
| 2.3.3.2 人血浆样品的蛋白质鉴定 | 第54页 |
| 2.3.3.3 人血浆样品亚硝基化研究的前处理 | 第54-55页 |
| 2.3.3.4 人血浆样品的亚硝基化位点鉴定 | 第55-56页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第56-72页 |
| 2.4.1 肽的标记 | 第56-58页 |
| 2.4.2 肽的纯化 | 第58-60页 |
| 2.4.3 BSA的标记 | 第60-62页 |
| 2.4.4 BSA的酶解产物分析 | 第62-66页 |
| 2.4.5 人血浆蛋白样品的亚硝基化蛋白鉴定 | 第66-72页 |
| 第三章 内皮细胞亚硝基化蛋白的组学研究 | 第72-88页 |
| 3.1 引言 | 第72页 |
| 3.2 实验仪器与材料 | 第72-75页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第72-74页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第74-75页 |
| 3.3 实验方法 | 第75-78页 |
| 3.3.1 内皮细胞培养 | 第75-76页 |
| 3.3.1.1 细胞复苏 | 第75页 |
| 3.3.1.2 细胞培养 | 第75-76页 |
| 3.3.2 内皮细胞总蛋白提取及浓度测定 | 第76页 |
| 3.3.3 内皮细胞总蛋白亚硝基化前处理 | 第76-77页 |
| 3.3.4 内皮细胞总蛋白的亚硝基化位点鉴定 | 第77-78页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第78-88页 |
| 3.4.1 内皮细胞总蛋白富集纯化 | 第78-79页 |
| 3.4.2 氧化应激下内皮细胞亚硝基化位点鉴定 | 第79-88页 |
| 第四章 结论 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-100页 |
| 致谢 | 第100-102页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及申请的专利 | 第102-103页 |
| 附件 | 第103页 |