| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-42页 |
| 第一章 内质网应激与ATF6研究进展 | 第18-33页 |
| 1.1 内质网应激与未折叠蛋白反应 | 第18-20页 |
| 1.2 内质网应激与未折叠蛋白反应信号通路 | 第20-23页 |
| 1.2.1 IRE-1 介导的未折叠蛋白反应信号通路 | 第21-22页 |
| 1.2.2 PERK介导的未折叠蛋白反应信号通路 | 第22-23页 |
| 1.2.3 ATF6介导的未折叠蛋白反应信号通路 | 第23页 |
| 1.3 内质网应激研究进展 | 第23-29页 |
| 1.3.1 内质网应激与未折叠蛋白反应信号通路的特点 | 第24页 |
| 1.3.2 内质网应激与细胞凋亡 | 第24-27页 |
| 1.3.3 内质网应激与疾病的发生 | 第27-29页 |
| 1.4 ATF6与内质网应激 | 第29-33页 |
| 1.4.1 ATF6的结构与功能特点 | 第29-31页 |
| 1.4.2 ATF6介导的内质网应激与疾病 | 第31-33页 |
| 第二章 雌性哺乳动物生殖与内质网应激 | 第33-42页 |
| 2.1 卵泡发育与闭锁的研究 | 第33-38页 |
| 2.1.1 卵泡发育与闭锁的调控 | 第34-36页 |
| 2.1.2 卵巢颗粒细胞凋亡与卵泡闭锁 | 第36-37页 |
| 2.1.3 内质网应激与卵泡的发育和闭锁 | 第37-38页 |
| 2.2 胚胎植入与蜕膜化的研究 | 第38-42页 |
| 2.2.1 胚胎植入与蜕膜化的调节 | 第38-40页 |
| 2.2.2 内质网应激与胚胎植入及蜕膜化 | 第40-42页 |
| 第二部分 试验研究 | 第42-130页 |
| 第三章 ATF6在小鼠发情周期中的表达与定位 | 第42-59页 |
| 3.1 材料及仪器 | 第42-43页 |
| 3.1.1 主要试剂与材料 | 第42-43页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第43页 |
| 3.1.3 实验动物 | 第43页 |
| 3.2 方法 | 第43-49页 |
| 3.2.1 雌性小鼠发情周期的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2.2 石蜡切片的制备 | 第44页 |
| 3.2.3 免疫组化染色 | 第44-45页 |
| 3.2.4 总RNA的提取 | 第45-46页 |
| 3.2.5 cDNA的反转录与合成 | 第46页 |
| 3.2.6 荧光定量PCR检测 | 第46-47页 |
| 3.2.7 总蛋白的提取 | 第47页 |
| 3.2.8 Western Blotting检测 | 第47-49页 |
| 3.3 结果 | 第49-57页 |
| 3.3.1 雌性小鼠发情周期不同阶段的鉴定与检测结果 | 第49页 |
| 3.3.2 免疫组化染色结果 | 第49-52页 |
| 3.3.3 实时荧光定量PCR结果 | 第52-54页 |
| 3.3.4 Western Blotting结果 | 第54-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-58页 |
| 3.5 小结 | 第58-59页 |
| 第四章 ATF6在小鼠胚胎附植时期子宫中的表达与调节 | 第59-77页 |
| 4.1 材料及仪器 | 第59-61页 |
| 4.1.1 主要试剂与材料 | 第59-60页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第60页 |
| 4.1.3 实验动物 | 第60-61页 |
| 4.2 方法 | 第61-62页 |
| 4.2.1 雌性小鼠早期正常妊娠模型的构建 | 第61页 |
| 4.2.2 假孕模型的构建 | 第61页 |
| 4.2.3 延迟着床与着床激活模型的构建 | 第61页 |
| 4.2.4 人工诱导蜕膜化子宫模型的构建 | 第61页 |
| 4.2.5 类固醇激素调节实验模型的构建 | 第61页 |
| 4.2.6 免疫组化检测 | 第61-62页 |
| 4.2.7 RNA提取及实时荧光定量PCR检测 | 第62页 |
| 4.2.8 总蛋白提取及Western Blotting检测 | 第62页 |
| 4.3 结果 | 第62-74页 |
| 4.3.1 免疫组化检测结果 | 第62-67页 |
| 4.3.2 RT-qPCR检测结果 | 第67-70页 |
| 4.3.3 Western Blotting检测结果 | 第70-74页 |
| 4.4 讨论 | 第74-76页 |
| 4.5 小结 | 第76-77页 |
| 第五章 小鼠ATF6基因shRNA干扰重组慢病毒载体的构建与鉴定 | 第77-93页 |
| 5.1 材料及仪器 | 第77-78页 |
| 5.1.1 主要试剂与材料 | 第77-78页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第78页 |
| 5.2 方法 | 第78-85页 |
| 5.2.1 小鼠ATF6基因shRNA重组慢病毒干扰载体的构建 | 第78-82页 |
| 5.2.2 ATF6-shRNA重组慢病毒的包装 | 第82-83页 |
| 5.2.3 ATF6-shRNA重组干扰慢病毒的滴度测定 | 第83-84页 |
| 5.2.4 ATF6-shRNA干扰片段的干扰效果检测与筛选 | 第84页 |
| 5.2.5 细胞RNA提取 | 第84页 |
| 5.2.6 cDNA的合成与实时荧光定量PCR检测 | 第84页 |
| 5.2.7 细胞总蛋白的提取 | 第84页 |
| 5.2.8 Western Blotting检测 | 第84-85页 |
| 5.3 结果 | 第85-91页 |
| 5.3.1 pCD513B-U6干扰载体双酶切线性化结果 | 第85页 |
| 5.3.2 pCD513B-U6-ATF6-shRNA重组慢病毒干扰载体的PCR鉴定结果 | 第85-86页 |
| 5.3.3 pCD513B-U6-ATF6-shRNA重组慢病毒干扰载体的测序鉴定结果 | 第86-87页 |
| 5.3.4 ATF6-shRNA慢病毒的包装结果 | 第87页 |
| 5.3.5 ATF6-shRNA包装慢病毒的滴度测定结果 | 第87-88页 |
| 5.3.6ATF6-shRNA慢病毒干扰效率检测结果 | 第88-91页 |
| 5.4 讨论 | 第91-92页 |
| 5.5 小结 | 第92-93页 |
| 第六章 ATF6在小鼠卵泡颗粒细胞中的功能研究 | 第93-116页 |
| 6.1 材料及仪器 | 第93-95页 |
| 6.1.1 主要试剂与材料 | 第93-94页 |
| 6.1.2 主要仪器 | 第94-95页 |
| 6.1.3 实验动物 | 第95页 |
| 6.2 方法 | 第95-101页 |
| 6.2.1 ATF6在小鼠卵泡不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达 | 第95页 |
| 6.2.2 小鼠卵泡颗粒细胞的原代培养与处理 | 第95页 |
| 6.2.3 小鼠卵泡颗粒细胞的纯度鉴定 | 第95-96页 |
| 6.2.4 ATF6-shRNA干扰慢病毒的包装以及滴度测定 | 第96页 |
| 6.2.5ATF6-shRNA干扰慢病毒的浓缩 | 第96-97页 |
| 6.2.6ATF6-shRNA干扰慢病毒感染小鼠卵巢颗粒细胞 | 第97页 |
| 6.2.7 小鼠卵泡颗粒细胞的活力检测 | 第97页 |
| 6.2.8 流式细胞术检测小鼠卵巢颗粒细胞的凋亡率 | 第97页 |
| 6.2.9 TUNEL法检测小鼠卵巢颗粒细胞的凋亡率 | 第97-98页 |
| 6.2.10 流式细胞术分析小鼠卵巢颗粒细胞周期分布 | 第98-99页 |
| 6.2.11 ELISA法检测小鼠卵泡颗粒细胞类固醇激素分泌活性 | 第99页 |
| 6.2.12 RNA提取与实时荧光定量PCR检测 | 第99-101页 |
| 6.2.13 细胞总蛋白提取与Western blotting检测 | 第101页 |
| 6.3 结果 | 第101-111页 |
| 6.3.1 免疫组化法检测ATF6在小鼠卵泡不同发育时期颗粒细胞中的表达 | 第101-102页 |
| 6.3.2 小鼠卵巢颗粒细胞的原代培养、形态观察以及纯度鉴定结果 | 第102-103页 |
| 6.3.3 ATF6在FSH和LH处理小鼠卵巢颗粒细胞中的表达结果 | 第103-104页 |
| 6.3.4ATF6-shRNA重组慢病毒感染小鼠卵巢颗粒细胞 | 第104页 |
| 6.3.5 ATF6-shRNA重组慢病毒在小鼠卵巢颗粒细胞中的干扰效率检测 | 第104-106页 |
| 6.3.6 ATF6干扰对颗粒细胞活力与凋亡率的影响 | 第106-108页 |
| 6.3.7 ATF6干扰对颗粒细胞周期分布的影响 | 第108-109页 |
| 6.3.8 ATF6干扰对颗粒细胞类固醇激素分泌的影响 | 第109-111页 |
| 6.3.9 ATF6干扰对颗粒细胞中与卵泡生长发育及排卵调控有关基因表达的影响 | 第111页 |
| 6.4 讨论 | 第111-114页 |
| 6.5 小结 | 第114-116页 |
| 第七章 ATF6在赤霉烯酮诱导小鼠颗粒细胞凋亡过程中作用的研究 | 第116-130页 |
| 7.1 材料及仪器 | 第116-117页 |
| 7.1.1 主要试剂与材料 | 第116-117页 |
| 7.1.2 主要仪器 | 第117页 |
| 7.1.3 实验动物 | 第117页 |
| 7.2 方法 | 第117-119页 |
| 7.2.1 小鼠卵巢颗粒细胞的获取、体外原代培养 | 第117页 |
| 7.2.2 赤霉烯酮处理对颗粒细胞活力的影响 | 第117-118页 |
| 7.2.3 ATF6在赤霉烯酮处理后颗粒细胞中的表达 | 第118页 |
| 7.2.4 抑制ATF6对赤霉烯酮处理后颗粒细胞活力与凋亡率的影响 | 第118页 |
| 7.2.5 抑制ATF6对赤霉烯酮处理后颗粒细胞周期分布的影响 | 第118页 |
| 7.2.6 抑制ATF6对赤霉烯酮处理后颗粒细胞类固醇激素分泌的影响 | 第118页 |
| 7.2.7 RNA提取与实时荧光定量PCR检测 | 第118-119页 |
| 7.2.8 抑制ATF6对赤霉烯酮诱导的内质网应激与细胞自噬的关键基因表达的影响 | 第119页 |
| 7.3 结果 | 第119-126页 |
| 7.3.1 赤霉烯酮对体外培养小鼠颗粒细胞活力的影响 | 第119-120页 |
| 7.3.2 ATF6在赤霉烯酮处理后颗粒细胞中的表达 | 第120-121页 |
| 7.3.3 抑制ATF6对赤霉烯酮处理后颗粒细胞凋亡率的影响 | 第121-122页 |
| 7.3.4 抑制ATF6对赤霉烯酮处理后颗粒细胞周期分布的影响 | 第122-124页 |
| 7.3.5 抑制ATF6对赤霉烯酮处理的颗粒细胞类固醇激素分泌的影响 | 第124-125页 |
| 7.3.6 抑制ATF6对赤霉烯酮诱导的颗粒细胞内质网应激中关键基因的影响 | 第125页 |
| 7.3.7 抑制ATF6对赤霉烯酮诱导的颗粒细胞自噬中关键基因的影响 | 第125-126页 |
| 7.4 讨论 | 第126-129页 |
| 7.5 小结 | 第129-130页 |
| 结论 | 第130-131页 |
| 创新点 | 第131-132页 |
| 下一步研究计划 | 第132-133页 |
| 参考文献 | 第133-152页 |
| 附录 常规试剂的配制 | 第152-153页 |
| 缩略词 | 第153-156页 |
| 致谢 | 第156-157页 |
| 作者简介 | 第157页 |
