| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 前言 | 第13-26页 |
| 1 研究背景 | 第13页 |
| 2 文献综述 | 第13-26页 |
| 2.1 CRISPR/Cas9基因编辑技术研究进展 | 第13-21页 |
| 2.2 转录因子Foxp3的研究背景 | 第21-26页 |
| 第2章 Foxp3基因靶位点设计及敲除载体的构建 | 第26-38页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-32页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1.1 实验试剂 | 第26页 |
| 2.1.1.2 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.1.3 溶液配置 | 第27页 |
| 2.1.1.4 菌株与质粒 | 第27-28页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第28-32页 |
| 2.1.2.1 Foxp3基因靶位点设计 | 第28页 |
| 2.1.2.2 引物设计 | 第28页 |
| 2.1.2.3 PX458质粒的线性化 | 第28页 |
| 2.1.2.4 琼脂糖凝胶电泳及胶回收 | 第28-29页 |
| 2.1.2.5 CaCl2制备感受态细胞DH5α | 第29页 |
| 2.1.2.6 连接与转化 | 第29-30页 |
| 2.1.2.7 菌液质粒抽提 | 第30-31页 |
| 2.1.2.8 双酶切电泳鉴定 | 第31页 |
| 2.1.2.9 质粒浓度和纯度的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.1.2.10 含有目的基因的质粒测序 | 第32页 |
| 2.1.2.11 乙醇沉淀法沉淀质粒 | 第32页 |
| 2.2 实验结果 | 第32-36页 |
| 2.2.1 靶位点的设计与引物的合成 | 第32-34页 |
| 2.2.2 载体质粒的构建 | 第34-36页 |
| 2.3 讨论与分析 | 第36-38页 |
| 第3章 靶向载体的转染及抑制靶细胞Foxp3的表达 | 第38-50页 |
| 3.1 材料与方法 | 第38-44页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第38-40页 |
| 3.1.1.1 实验试剂 | 第38页 |
| 3.1.1.2 实验仪器 | 第38-39页 |
| 3.1.1.3 溶液配置 | 第39-40页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第40-44页 |
| 3.1.2.1 小鼠脾细胞制备与培养 | 第40页 |
| 3.1.2.2 细胞计数 | 第40页 |
| 3.1.2.3 电转染靶细胞 | 第40-41页 |
| 3.1.2.4 MTT检测诱导增殖 | 第41页 |
| 3.1.2.5 RT-PCR鉴定Foxp3基因的表达 | 第41-43页 |
| 3.1.2.6 小鼠Treg染色及流式检测Foxp3表达 | 第43-44页 |
| 3.2 实验结果 | 第44-48页 |
| 3.2.1 荧光显微镜检测转染结果 | 第44页 |
| 3.2.2 RT-PCR检测Foxp3基因表达电泳结果 | 第44-45页 |
| 3.2.3 小鼠Treg染色流式检测结果 | 第45-47页 |
| 3.2.4 MTT检测细胞增殖结果 | 第47-48页 |
| 3.3 讨论与分析 | 第48-50页 |
| 第4章 电穿孔介导的靶向载体在小鼠体内的表达 | 第50-59页 |
| 4.1 材料与方法 | 第50-53页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 4.1.1.1 实验试剂 | 第50页 |
| 4.1.1.2 实验仪器 | 第50-51页 |
| 4.1.1.3 溶液配置 | 第51页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第51-53页 |
| 4.1.2.1 肿瘤细胞培养 | 第51页 |
| 4.1.2.2 小鼠肿瘤模型的建立 | 第51页 |
| 4.1.2.3 载体质粒的注射及体内电转染 | 第51页 |
| 4.1.2.4 实验小鼠的肿瘤生长观察 | 第51-52页 |
| 4.1.2.5 实验小鼠的血细胞分析 | 第52页 |
| 4.1.2.6 实验小鼠脾细胞计数 | 第52页 |
| 4.1.2.7 ELISA检测小鼠血清中的细胞因子 | 第52页 |
| 4.1.2.8 流式细胞术检测 | 第52-53页 |
| 4.2 实验结果 | 第53-57页 |
| 4.2.1 小鼠体重变化结果 | 第53-54页 |
| 4.2.2 小鼠肿瘤生长情况 | 第54页 |
| 4.2.3 小鼠脾细胞计数及血细胞分析 | 第54-55页 |
| 4.2.4 小鼠血清ELISA检测结果 | 第55-56页 |
| 4.2.5 小鼠脾细胞流式分析结果 | 第56-57页 |
| 4.3 讨论与分析 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-68页 |
| 附录A 中英文缩略词 | 第68-69页 |
| 附录B 实验试剂配置 | 第69-70页 |
| 附录C 细胞计数实验方法 | 第70-71页 |
| 附录D RNA提取实验方法 | 第71-72页 |
| 附录E 肿瘤细胞的培养 | 第72-73页 |
| 附录F ELISA实验方法 | 第73-74页 |
| 作者简历 | 第74页 |
