| 附件 | 第3-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 动物对蛋白质的消化 | 第12-13页 |
| 1.1.1 胃蛋白酶 | 第12页 |
| 1.1.2 胰蛋白酶 | 第12-13页 |
| 1.1.3 肽酶 | 第13页 |
| 1.1.4 其他蛋白酶 | 第13页 |
| 1.2 影响蛋白质消化率的因素 | 第13-15页 |
| 1.2.1 动物年龄 | 第13-14页 |
| 1.2.2 蛋白质的溶解度 | 第14页 |
| 1.2.3 蛋白质的二硫键含量 | 第14页 |
| 1.2.4 其他影响因素 | 第14-15页 |
| 1.3 饲粮中蛋白质的化学结构 | 第15-16页 |
| 1.3.1 豆粕 | 第15页 |
| 1.3.2 玉米酒糟 | 第15页 |
| 1.3.3 血粉 | 第15页 |
| 1.3.4 羊毛与羽毛 | 第15-16页 |
| 1.4 角蛋白的水解 | 第16-19页 |
| 1.4.1 二硫键的打开 | 第16-17页 |
| 1.4.2 二硫键还原酶 | 第17-19页 |
| 1.4.3 角蛋白水解相关酶的克隆表达 | 第19页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 1.6 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 地衣芽孢杆菌CP-16产胞外蛋白酶的分离纯化与克隆表达 | 第22-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-23页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.2.1 粗酶液的制备及浓缩 | 第23-24页 |
| 2.2.2 阴离子交换层析（Q-Sepharose FF） | 第24-25页 |
| 2.2.3 目的基因的克隆表达 | 第25页 |
| 2.2.4 重组蛋白酶最适pH和最适温度 | 第25页 |
| 2.2.5 重组蛋白酶水解羽毛角蛋白中的作用 | 第25-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-31页 |
| 2.3.1 粗酶液的制备与浓缩 | 第26页 |
| 2.3.2 阴离子交换层析和活性峰鉴定 | 第26-28页 |
| 2.3.3 氨基酸序列测定 | 第28页 |
| 2.3.4 寡肽酶的克隆表达 | 第28-30页 |
| 2.3.5 寡肽酶的最适pH与最适温度 | 第30页 |
| 2.3.6 寡肽酶对角蛋白酶K水解酪蛋白水解度的影响 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 地衣芽孢杆菌CP-16和嗜麦芽窄食单胞菌10号菌具二硫键还原酶活性基因克隆与表达 | 第33-43页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-37页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第33页 |
| 3.1.2 主要仪器和试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.3 引物合成 | 第34页 |
| 3.1.4 目的基因的克隆 | 第34-35页 |
| 3.1.5 目的基因的表达 | 第35-36页 |
| 3.1.6 表达载体的转化 | 第36页 |
| 3.1.7 重组基因的诱导表达 | 第36-37页 |
| 3.1.8 重组酶蛋白比活力测定 | 第37页 |
| 3.2 结果与分析 | 第37-41页 |
| 3.2.1 目的基因的克隆 | 第37页 |
| 3.2.2 目的基因序列测定结果 | 第37-40页 |
| 3.2.3 目的基因的酶切与连接 | 第40页 |
| 3.2.4 重组基因的诱导表达 | 第40页 |
| 3.2.5 重组酶蛋白比活力测定 | 第40-41页 |
| 3.3 讨论 | 第41页 |
| 3.4 小结 | 第41-43页 |
| 第四章 不同具二硫键还原酶活性的重组酶酶学性质及与角蛋白酶角蛋白水解相互关系 | 第43-53页 |
| 4.1 材料与方法 | 第43-46页 |
| 4.1.1 酶蛋白 | 第43页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第43页 |
| 4.1.3 主要试剂及其配制 | 第43-44页 |
| 4.1.4 重组酶最适反应pH | 第44页 |
| 4.1.5 重组酶最适反应温度 | 第44页 |
| 4.1.6 胰蛋白酶和糜蛋白酶与重组酶的相互作用 | 第44-45页 |
| 4.1.7 重组酶对胰蛋白酶和糜蛋白酶降解豆粕的影响 | 第45页 |
| 4.1.8 各重组酶与角蛋白酶水解羽毛相互关系研究 | 第45-46页 |
| 4.2 结果与分析 | 第46-50页 |
| 4.2.1 各重组酶最适酶促反应pH | 第46-47页 |
| 4.2.2 各重组酶最适酶促反应温度的测定 | 第47-48页 |
| 4.2.3 胰蛋白酶和糜蛋白酶对重组酶二硫键还原酶活性的影响 | 第48页 |
| 4.2.4 重组酶对胰蛋白酶和糜蛋白酶的影响 | 第48-49页 |
| 4.2.5 重组酶对胰蛋白酶和糜蛋白酶降解豆粕的影响 | 第49页 |
| 4.2.6 各重组酶水解羽毛角蛋白的协同作用 | 第49-50页 |
| 4.3 讨论 | 第50-52页 |
| 4.4 小结 | 第52-53页 |
| 第五章 全文结论 | 第53-54页 |
| 5.1 主要结论 | 第53页 |
| 5.2 创新点 | 第53页 |
| 5.3 研究展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 附录 | 第59-62页 |
| 1 胰蛋白酶和胰糜蛋白酶的测定方法 | 第59-60页 |
| 2 角蛋白酶活性测定 | 第60-61页 |
| 3 二硫键还原酶活性测定 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简历 | 第63页 |
