| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第18-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-31页 |
| 1.1 支原体及滑液支原体 | 第19-24页 |
| 1.1.1 支原体 | 第19页 |
| 1.1.2 滑液支原体 | 第19-24页 |
| 1.2 蛋白质组学及其研究内容、技术和在兽医研究中的应用 | 第24-27页 |
| 1.2.1 蛋白质组学研究的内容 | 第25页 |
| 1.2.2 蛋白质组学研究技术 | 第25-26页 |
| 1.2.3 蛋白质组学在兽医研究中的应用 | 第26-27页 |
| 1.3 滑液支原体蛋白质组学研究 | 第27-29页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第29-31页 |
| 第二章 滑液支原体WV_(1853)株主要免疫相关膜蛋白的鉴定 | 第31-41页 |
| 摘要 | 第31-32页 |
| 2.1 材料与方法 | 第32-36页 |
| 2.1.1 菌株和培养条件 | 第32页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第32页 |
| 2.1.4 培养基,主要缓冲液及试剂的配制 | 第32-33页 |
| 2.1.5 滑液支原体的培养 | 第33页 |
| 2.1.6 WVU_(1853)株兔多抗及鸡多抗的制备 | 第33页 |
| 2.1.7 制备膜蛋白 | 第33-35页 |
| 2.1.8 蛋白质的双向电泳 | 第35-36页 |
| 2.1.9 免疫印迹 | 第36页 |
| 2.1.10 质谱分析 | 第36页 |
| 2.2 结果 | 第36-39页 |
| 2.2.1 MS WVU_(1853)株膜蛋白及亲水蛋白的SDS-PAGE结果 | 第36页 |
| 2.2.2 MS WVU_(1853)株膜蛋白的Western blot结果 | 第36-37页 |
| 2.2.3 质谱结果及数据分析 | 第37-39页 |
| 2.3 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 基于冰核蛋白N-端结构域的大肠杆菌表面展示载体的构建及在支原体粘附蛋白鉴定中的应用 | 第41-54页 |
| 摘要 | 第41-42页 |
| 3.1 材料和方法 | 第42-47页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第42页 |
| 3.1.2 细胞系 | 第42页 |
| 3.1.3 化学试剂、酶及抗体 | 第42页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第42-43页 |
| 3.1.5 培养基,主要缓冲液及试剂的配制 | 第43-44页 |
| 3.1.6 鸡毒支原体的培养 | 第44页 |
| 3.1.7 鸡毒支原体基因组的粗提 | 第44页 |
| 3.1.8 细胞培养 | 第44页 |
| 3.1.9 截短的冰核蛋白N-末端DNA序列的合成及质粒构建 | 第44-45页 |
| 3.1.10 融合蛋白的表达 | 第45-46页 |
| 3.1.11 EGFP荧光检测 | 第46页 |
| 3.1.12 大肠杆菌细胞的分级分离 | 第46页 |
| 3.1.13 SDS-PAGE及Western blot分析 | 第46页 |
| 3.1.14 免疫荧光显微镜观察 | 第46-47页 |
| 3.1.15 全菌的ELISA检测 | 第47页 |
| 3.1.16 InaZN-EGFP-Mgc2阳性表达菌对宿主细胞的粘附试验 | 第47页 |
| 3.2 结果 | 第47-52页 |
| 3.2.1 细胞膜表面展示载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.2.2 融合蛋白InaZN/EGFP及InaZN/EGFP/Mgc2的表达 | 第48-49页 |
| 3.2.3 融合蛋白的定位 | 第49-50页 |
| 3.2.4 重组的融合蛋白在细胞表面的展示 | 第50-52页 |
| 3.2.5. 表面展示Mgc2的大肠杆菌对DF-1细胞的粘附 | 第52页 |
| 3.3 讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 滑液支原体丙酮酸脱羧酶A亚基生物学特性研究 | 第54-66页 |
| 摘要 | 第54页 |
| 4.1 材料和方法 | 第54-58页 |
| 4.1.1 菌种、载体 | 第54页 |
| 4.1.2 抗体及实验动物 | 第54页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第54-55页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第55页 |
| 4.1.5 培养基、主要缓冲液及试剂配制 | 第55页 |
| 4.1.6 MS基因组的提取 | 第55页 |
| 4.1.7 pdcA基因的克隆及载体的构建 | 第55-56页 |
| 4.1.8 pdcA基因的原核表达及蛋白纯化 | 第56-57页 |
| 4.1.9 PDCA兔多抗的制备 | 第57页 |
| 4.1.10 PDCA在MS细胞内的分布分析 | 第57页 |
| 4.1.11 PDCA与Plg和Fn结合试验 | 第57-58页 |
| 4.1.12 PDCA多抗介导的补体杀菌实验 | 第58页 |
| 4.1.13 粘附及其粘附抑制实验 | 第58页 |
| 4.1.14 PDCA~+Ecoli DF-1细胞的粘附及其粘附抑制实验 | 第58页 |
| 4.2 结果 | 第58-64页 |
| 4.2.1 pdcA基因的克隆 | 第58-59页 |
| 4.2.2 pdcA基因的表达 | 第59页 |
| 4.2.3 pdcA基因表达产物的纯化 | 第59-60页 |
| 4.2.4 PDCA兔多抗效价的检测 | 第60-61页 |
| 4.2.5 PDCA在细胞内的分布 | 第61-62页 |
| 4.2.6 PDCA与鸡的血纤溶酶原(Plg)和人的纤连蛋白(Fn)的结合活性 | 第62-63页 |
| 4.2.7 PDCA多抗血清的体外杀菌实验 | 第63页 |
| 4.2.8 PDCA抗血清的粘附抑制实验 | 第63页 |
| 4.2.9 PDCA~+E.coli DF-1细胞的粘附及其粘附抑制实验 | 第63-64页 |
| 4.3 讨论 | 第64-66页 |
| 第五章 滑液支原体丙酮酸脱羧酶B亚基生物学特性研究 | 第66-77页 |
| 摘要 | 第66页 |
| 5.1 材料和方法 | 第66-70页 |
| 5.1.1 菌种、载体 | 第66页 |
| 5.1.2 抗体及及实验动物 | 第66页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第66页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第66-67页 |
| 5.1.5 主要缓冲液及试剂配制 | 第67页 |
| 5.1.6 MS基因组的提取 | 第67页 |
| 5.1.7 pdcB基因的克隆及载体的构建 | 第67页 |
| 5.1.8 pdcB基因的原核表达 | 第67-68页 |
| 5.1.9 重组蛋白的纯化 | 第68页 |
| 5.1.10 PDCB兔多抗的制备 | 第68页 |
| 5.1.11 PDCB在MS细胞内的分布 | 第68页 |
| 5.1.12 PDCB与Plg和Fn结合试验 | 第68-69页 |
| 5.1.13 His-PDCB多抗介导的补体杀菌实验 | 第69页 |
| 5.1.14 粘附及其粘附抑制实验 | 第69-70页 |
| 5.1.15 PDCB~+E.coli对DF-1细胞的粘附及其粘附抑制实验 | 第70页 |
| 5.2 结果 | 第70-75页 |
| 5.2.1 pdcB基因的克隆 | 第70-71页 |
| 5.2.2 pdcB基因的表达 | 第71页 |
| 5.2.3 pdcB基因表达产物的纯化 | 第71-72页 |
| 5.2.4 His-PDCB兔多抗效价的检测 | 第72页 |
| 5.2.5 PDCB在细胞内的分布 | 第72-73页 |
| 5.2.6 纤溶酶原(Plg)及纤连蛋白(Fn)与His-PDCB的结合活性 | 第73-74页 |
| 5.2.7 His-PDCB抗血清的体外杀菌实验 | 第74页 |
| 5.2.8 PDCB抗血清的粘附抑制实验 | 第74-75页 |
| 5.2.9 PDCB~+E.coli D F-1细胞的粘附及其粘附抑制实验 | 第75页 |
| 5.3 讨论 | 第75-77页 |
| 第六章 MS WVU_(1853)株pdcA/pdcB基因共表达质粒的构建及原核表达 | 第77-84页 |
| 摘要 | 第77页 |
| 6.1 材料和方法 | 第77-80页 |
| 6.1.1 菌种、载体 | 第77页 |
| 6.1.2 抗体 | 第77页 |
| 6.1.3 主要试剂 | 第77页 |
| 6.1.4 主要仪器 | 第77-78页 |
| 6.1.5 主要缓冲液及试剂配制 | 第78页 |
| 6.1.6 共表达载体的构建 | 第78-79页 |
| 6.1.7 pdcA及pdcB基因的原核共表达 | 第79页 |
| 6.1.8 共表达蛋白的纯化 | 第79页 |
| 6.1.9 共表达产物酶活性测定 | 第79页 |
| 6.1.10 pET-AB表达纯化产物的酶促米氏常数 | 第79-80页 |
| 6.2 结果 | 第80-82页 |
| 6.2.1 pdcB基因的克隆 | 第80页 |
| 6.2.2 pdcA及pdcB基因的共表达 | 第80-81页 |
| 6.2.3 pdcB基因表达产物的纯化 | 第81-82页 |
| 6.2.4 共表达产物酶活性测定 | 第82页 |
| 6.2.5 pET-AB表达纯化产物的酶促米氏常数 | 第82页 |
| 6.3 讨论 | 第82-84页 |
| 第七章 全文结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 作者简介 | 第95页 |
