| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第1章 绪论 | 第14-35页 |
| 1.1 组织工程概述 | 第14页 |
| 1.2 组织构建基本要素 | 第14-20页 |
| 1.2.1 种子细胞 | 第15-17页 |
| 1.2.1.1 成体细胞 | 第15-16页 |
| 1.2.1.2 干细胞 | 第16-17页 |
| 1.2.2 支架材料 | 第17-18页 |
| 1.2.3 体外组织构建技术 | 第18-20页 |
| 1.2.3.1 静态培养 | 第18页 |
| 1.2.3.2 动态培养 | 第18-20页 |
| 1.3 骨组织工程 | 第20-24页 |
| 1.3.1 骨组织基本结构及形成 | 第20-21页 |
| 1.3.2 骨组织工程研究现状 | 第21-23页 |
| 1.3.2.1 支架材料和种子细胞 | 第21-22页 |
| 1.3.2.2 支架材料和生长因子 | 第22-23页 |
| 1.3.2.3 支架材料、干细胞和生长因子 | 第23页 |
| 1.3.3 针对大尺寸骨组织修复的研究 | 第23-24页 |
| 1.4 Bottom-up技术构建工程化组织 | 第24-33页 |
| 1.4.1 传统组织工程存在问题 | 第24-27页 |
| 1.4.1.1 构建物中的物质传递 | 第24-25页 |
| 1.4.1.2 现有解决传质限制的方法 | 第25-27页 |
| 1.4.2 Bottom-up技术 | 第27-31页 |
| 1.4.2.1 Top-down和Bottom-up技术简介 | 第27页 |
| 1.4.2.2 微组织制备 | 第27-30页 |
| 1.4.2.3 微组织组装方法 | 第30-31页 |
| 1.4.3 组织微构重塑技术 | 第31-33页 |
| 1.4.3.1 基于微载体支架的微组织制备 | 第31-32页 |
| 1.4.3.2 基于微构重塑技术的大尺寸组织体外构建 | 第32-33页 |
| 1.5 本研究的目的意义与研究内容 | 第33-35页 |
| 第2章 应用组织微构重塑技术构建工程化骨组织的可行性研究 | 第35-61页 |
| 2.1 前言 | 第35-36页 |
| 2.2 材料与方法 | 第36-41页 |
| 2.2.1 人羊膜来源间充质干细胞(hAMSCs) | 第36-37页 |
| 2.2.2 转瓶微载体培养系统的预处理 | 第37页 |
| 2.2.3 有关操作参数的实验方法 | 第37页 |
| 2.2.4 模块组织制备 | 第37-38页 |
| 2.2.5 工程化骨组织的装配及构建 | 第38页 |
| 2.2.6 细胞增殖参数检测 | 第38-39页 |
| 2.2.7 代谢参数检测 | 第39页 |
| 2.2.8 扫描电镜观察 | 第39页 |
| 2.2.9 组织中细胞活性观察 | 第39-40页 |
| 2.2.10 聚团粒径测量 | 第40页 |
| 2.2.11 胶原基质的表征 | 第40页 |
| 2.2.12 碱性磷酸酯酶(ALP)的测定 | 第40页 |
| 2.2.13 钙基质的检测 | 第40-41页 |
| 2.2.14 数据统计分析 | 第41页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第41-59页 |
| 2.3.1 操作参数对hAMSCs增殖的影响 | 第41-48页 |
| 2.3.1.1 微载体种类对hAMSCs增殖的影响 | 第41-43页 |
| 2.3.1.2 细胞接种密度对hAMSCs增殖的影响 | 第43-44页 |
| 2.3.1.3 搅拌转速对hAMSCs增殖的影响 | 第44-46页 |
| 2.3.1.4 微载体浓度对hAMSCs增殖的影响 | 第46-48页 |
| 2.3.2 骨微组织的制备 | 第48-54页 |
| 2.3.2.1 微组织制备过程中的细胞增殖和代谢特性 | 第48-50页 |
| 2.3.2.2 微组织制备过程中的细胞活性及胞外基质 | 第50-52页 |
| 2.3.2.3 微组织的成骨分化特性 | 第52-54页 |
| 2.3.3 厘米级工程化骨组织的构建 | 第54-59页 |
| 2.3.3.1 组装厘米级组织的灌注培养系统 | 第54-56页 |
| 2.3.3.2 工程化组织中的细胞活性、分布及基质分泌 | 第56-58页 |
| 2.3.3.3 工程化组织的成骨分化特性 | 第58-59页 |
| 2.4 讨论 | 第59页 |
| 2.5 本章小结 | 第59-61页 |
| 第3章 添加剂对微组织制备及大尺寸骨组织构建的影响 | 第61-92页 |
| 3.1 前言 | 第61-62页 |
| 3.2 材料与方法 | 第62-65页 |
| 3.2.1 人羊膜来源间充质干细胞(hAMSCs) | 第62-63页 |
| 3.2.2 添加剂对hAMSCs增殖的影响 | 第63页 |
| 3.2.3 添加剂对hAMSCs成骨分化的影响 | 第63页 |
| 3.2.4 骨微组织的制备 | 第63-64页 |
| 3.2.5 厘米级工程化组织的装配及构建 | 第64页 |
| 3.2.6 细胞增殖参数的测定 | 第64页 |
| 3.2.7 细胞代谢参数的检测 | 第64页 |
| 3.2.8 扫描电镜观察 | 第64页 |
| 3.2.9 细胞死活荧光染色分析 | 第64页 |
| 3.2.10 聚团粒径测量 | 第64页 |
| 3.2.11 胶原基质的表征 | 第64页 |
| 3.2.12 碱性磷酸酯酶(ALP)测定 | 第64-65页 |
| 3.2.13 钙基质的检测 | 第65页 |
| 3.2.14 数据统计分析 | 第65页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第65-89页 |
| 3.3.1 添加剂对hAMSCs增殖和成骨分化的影响 | 第65-74页 |
| 3.3.1.1 添加剂对hAMSCs增殖和代谢的影响 | 第65-69页 |
| 3.3.1.2 添加剂对hAMSCs向成骨分化的影响 | 第69-74页 |
| 3.3.2 添加剂对骨微组织制备的影响 | 第74-83页 |
| 3.3.2.1 骨微组织制备过程中添加剂对细胞生长和代谢的影响 | 第74-76页 |
| 3.3.2.2 骨微组织制备过程中添加剂对微组织尺度、细胞活性及胞外基质沉积的影响 | 第76-80页 |
| 3.3.2.3 微组织制备过程中添加剂对细胞成骨分化特性的影响 | 第80-83页 |
| 3.3.3 厘米级工程化骨组织的构建 | 第83-89页 |
| 3.3.3.1 厘米级工程化骨组织的大体观察 | 第83页 |
| 3.3.3.2 厘米级工程化骨组织中的细胞活性及基质分泌 | 第83-88页 |
| 3.3.3.3 厘米级工程化骨组织的成骨分化特性 | 第88-89页 |
| 3.4 讨论 | 第89-91页 |
| 3.5 本章小结 | 第91-92页 |
| 第4章 灌注培养时间对大尺寸骨组织构建及其体内成骨性能的影响 | 第92-115页 |
| 4.1 前言 | 第92页 |
| 4.2 材料与方法 | 第92-95页 |
| 4.2.1 微组织制备 | 第92-93页 |
| 4.2.2 厘米级工程化骨组织的装配及构建 | 第93页 |
| 4.2.3 皮下异位成骨移植实验 | 第93-94页 |
| 4.2.4 细胞活性检测 | 第94页 |
| 4.2.5 MTT检测 | 第94页 |
| 4.2.6 DNA含量检测 | 第94页 |
| 4.2.7 扫描电镜观察 | 第94页 |
| 4.2.8 碱性磷酸酶的测定 | 第94页 |
| 4.2.9 钙沉积的检测 | 第94页 |
| 4.2.10 Micro-CT检测 | 第94页 |
| 4.2.11 组织学检测 | 第94-95页 |
| 4.2.12 免疫组织化学检测 | 第95页 |
| 4.2.13 数据统计学分析 | 第95页 |
| 4.3 结果 | 第95-113页 |
| 4.3.1 采用hAMSCs和CultiSpher S微载体制备骨微组织 | 第95页 |
| 4.3.2 体外灌注培养时间对工程化组织性能的影响 | 第95-100页 |
| 4.3.3 灌注培养时间对体外构建的工程化组织成骨分化特性的影响 | 第100-102页 |
| 4.3.4 体内异位成骨皮下移植实验 | 第102-104页 |
| 4.3.5 移植物组织的活性及基质分泌 | 第104-108页 |
| 4.3.6 异位成骨移植物的组织学相关检测 | 第108-113页 |
| 4.4 讨论 | 第113-114页 |
| 4.5 本章小结 | 第114-115页 |
| 第5章 全文总结与展望 | 第115-118页 |
| 参考文献 | 第118-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 研究成果 | 第131页 |
