| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 MIRNA的发现 | 第10页 |
| 1.2 MIRNA的产生 | 第10-17页 |
| 1.2.1 参与MIR基因转录合成过程中的蛋白因子 | 第11-14页 |
| 1.2.2 pri-miRNA的转录后水平调控 | 第14-17页 |
| 1.2.2.1 pri-miRNA的转录后修饰 | 第14-15页 |
| 1.2.2.2 pri-miRNA转录后加工 | 第15-17页 |
| 1.3 MIRNA的作用机制 | 第17页 |
| 1.4 SRNA在组织间及细胞间的运动 | 第17-19页 |
| 1.4.1 sRNA在组织间的运动 | 第17-18页 |
| 1.4.2 sRNA在细胞间的运动 | 第18-19页 |
| 1.5 MIRNA通路新调控因子筛选系统 | 第19-21页 |
| 1.5.1 SUC2:amiR-SUL株系介绍 | 第19-20页 |
| 1.5.2 利用EMS诱变获得突变植株 | 第20-21页 |
| 1.6 研究内容、目的与意义 | 第21-22页 |
| 第2章 材料和方法 | 第22-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 数据库和生物软件 | 第22页 |
| 2.1.3 实验主要引物序列 | 第22-26页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第26页 |
| 2.1.5 主要试剂和试剂盒 | 第26-28页 |
| 2.2 主要培养基及试剂的配制 | 第28-31页 |
| 2.2.1 主要培养基的配制 | 第28-29页 |
| 2.2.2 主要抗生素的配制 | 第29页 |
| 2.2.3 EMS突变主要试剂的配制 | 第29页 |
| 2.2.4 DNA提取主要试剂的配制 | 第29页 |
| 2.2.5 核酸电泳buffer的配制 | 第29-30页 |
| 2.2.6 蛋白纯化主要试剂的配制 | 第30页 |
| 2.2.7 蛋白质提取试剂的配制 | 第30页 |
| 2.2.8 SDS-PAGE凝胶蛋白质电泳常用试剂的配置 | 第30-31页 |
| 2.2.9 Western blot主要试剂的配制 | 第31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-40页 |
| 2.3.1 EMS突变及表型观察 | 第31页 |
| 2.3.2 拟南芥的种植及其生长条件 | 第31-32页 |
| 2.3.3 拟南芥RNA提取 | 第32页 |
| 2.3.4 反转录 | 第32-34页 |
| 2.3.4.1 RNA反转录成cDNA | 第32-33页 |
| 2.3.4.2 stem-loop RT-PCR | 第33-34页 |
| 2.3.5 实时荧光定量PCR | 第34页 |
| 2.3.6 拟南芥基因组DNA精提 | 第34-35页 |
| 2.3.7 拟南芥基因组DNA粗提 | 第35页 |
| 2.3.8 基因型鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.9 载体构建 | 第36-37页 |
| 2.3.10 LR反应 | 第37页 |
| 2.3.11 冻融法转化农杆菌 | 第37-38页 |
| 2.3.12 农杆菌浸染拟南芥花序 | 第38页 |
| 2.3.13 蛋白表达纯化 | 第38-39页 |
| 2.3.13.1 蛋白表达载体构建及小量诱导表达 | 第38页 |
| 2.3.13.2 原核表达蛋白大量诱导表达及纯化 | 第38-39页 |
| 2.3.14 Western blot检测植株蛋白含量 | 第39-40页 |
| 第3章 结果 | 第40-56页 |
| 3.1 突变株的表型观察 | 第40-41页 |
| 3.2 突变体植株中MIRNA和靶标MRNA的表达水平 | 第41-44页 |
| 3.2.1 突变体植株中miRNA的表达水平 | 第41-42页 |
| 3.2.2 突变体植株中miRNA靶标基因的表达水平 | 第42-43页 |
| 3.2.3 突变体植株中pri-miRNA的表达水平 | 第43-44页 |
| 3.3 SUP-B65突变体突变基因的确定 | 第44-49页 |
| 3.3.1 纯合F2基因组DNA提取结果 | 第44-45页 |
| 3.3.2 全基因组重测序结果 | 第45-46页 |
| 3.3.3 SUC2:amiR-SUL×SUP-B65 F2代纯合突变体基因型鉴定 | 第46-49页 |
| 3.4 回复突变结果 | 第49-50页 |
| 3.4.1 CPR1和ABA1回复突变载体构建结果 | 第49页 |
| 3.4.2 农杆菌浸染及种子筛选 | 第49-50页 |
| 3.5 CPR1蛋白体外表达纯化 | 第50-56页 |
| 3.5.1 CPR1蛋白表达载体构建 | 第50-52页 |
| 3.5.2 CPR1蛋白小量诱导表达 | 第52-53页 |
| 3.5.3 CPR1蛋白大量表达纯化 | 第53-54页 |
| 3.5.4 Western blot检测CPR1抗体效果 | 第54-56页 |
| 第4章 讨论 | 第56-59页 |
| 第5章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-69页 |
