| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| 1.1 胆汁酸概况 | 第10-16页 |
| 1.1.1 胆汁酸来源及分类 | 第10页 |
| 1.1.2 胆汁酸生理作用 | 第10页 |
| 1.1.3 胆汁酸受体研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1.4 TGR5受体研究概况 | 第11-16页 |
| 1.2 TCDCA研究概况 | 第16-18页 |
| 1.2.1 TCDCA的理化性质 | 第16页 |
| 1.2.2 TCDCA作用的研究概况 | 第16-18页 |
| 1.3 真核表达系统和 293T细胞 | 第18页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1 细胞、组织 | 第19页 |
| 2.2 实验试剂、药品 | 第19页 |
| 2.3 试验仪器 | 第19-20页 |
| 3 数据处理和统计学分析 | 第20页 |
| 4 试验方法 | 第20-32页 |
| 4.1 TGR5真核表达载体的构建 | 第20-26页 |
| 4.1.1 引物设计与合成 | 第20页 |
| 4.1.2 PCMV-EGFP-TGR5真核表达载体构建 | 第20-25页 |
| 4.1.3 pCMV-TGR5载体构建构建 | 第25-26页 |
| 4.2 TGR5受体在细胞中的表达及其测定 | 第26-29页 |
| 4.2.1 293T细胞的培养 | 第26页 |
| 4.2.2 TGR5在 293T细胞中的瞬时转染 | 第26页 |
| 4.2.3 TGR5在 293T细胞中转染效果的测定 | 第26页 |
| 4.2.4 TGR5受体表达定位 | 第26-27页 |
| 4.2.5 293T细胞中TGR5基因mRNA表达量测定 | 第27-28页 |
| 4.2.6 293T细胞中TGR5蛋白表达 | 第28-29页 |
| 4.3 TCDCA与TGR5的结合活性的研究 | 第29-32页 |
| 4.3.1 TCDCA的量效关系分析 | 第29-31页 |
| 4.3.2 TGR5受体内陷 | 第31页 |
| 4.3.3 TCDCA对细胞内cAMP含量的影响 | 第31页 |
| 4.3.4 TCDCA对细胞内荧光素酶报告基因含量的影响 | 第31-32页 |
| 5 结果与讨论 | 第32-47页 |
| 5.1 含TGR5目的片段真核表达载体的构建 | 第32-38页 |
| 5.1.1 人TGR5基因扩增 | 第32-33页 |
| 5.1.2 重组质粒pMD19-T-TGR5鉴定 | 第33-35页 |
| 5.1.3 真核表达载体pCMV-EGFP-TGR5的鉴定 | 第35-36页 |
| 5.1.4 pCMV-TGR5质粒鉴定 | 第36-38页 |
| 5.2 TGR5受体在细胞中的表达及其测定 | 第38-42页 |
| 5.2.1 TGR5在 293T细胞中转染效果的测定 | 第38页 |
| 5.2.2 TGR5受体定位 | 第38-39页 |
| 5.2.3 293T细胞细胞中TGR5基因mRNA表达量测定 | 第39-41页 |
| 5.2.4 293T细胞中TGR5蛋白表达 | 第41-42页 |
| 5.3 TCDCA与TGR5的结合活性的研究 | 第42-47页 |
| 5.3.1 TCDCA的量效关系分析 | 第42-43页 |
| 5.3.2 293T细胞内陷的测定 | 第43-44页 |
| 5.3.3 细胞内cAMP含量测定 | 第44-46页 |
| 5.3.4 荧光素酶报告基因含量测定 | 第46-47页 |
| 6 全文讨论 | 第47-51页 |
| 6.1 真核表达载体构建 | 第47-48页 |
| 6.2 TCDCA与TGR5相互作用 | 第48-49页 |
| 6.2.1 受体内陷的研究 | 第48页 |
| 6.2.2 TCDCA作用于TGR5后的量效关系分析 | 第48-49页 |
| 6.2.3 TCDCA与TGR5结合后的继发反应 | 第49页 |
| 6.3 TGR5介导的信号通路研究 | 第49-51页 |
| 7 全文结论 | 第51页 |
| 8 课题创新之处 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 作者简介 | 第60-61页 |
