| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 英汉缩略语名词对照 | 第12-17页 |
| 1 引言 | 第17-21页 |
| 2 第一部分 TR4在人类CCRCC组织标本和细胞株中的表达、与患者预后相关性及其在CCRCC侵袭转移中功能的研究 | 第21-38页 |
| 2.1 材料和仪器 | 第21-24页 |
| 2.1.1 人类ccRCC组织标本 | 第21-22页 |
| 2.1.2 细胞系 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 临床资料 | 第24-26页 |
| 2.2.2 免疫组织化学染色 | 第26页 |
| 2.2.3 免疫组织化学染色结果判定 | 第26页 |
| 2.2.4 TCGA数据库数据分析 | 第26-27页 |
| 2.2.5 细胞培养 | 第27页 |
| 2.2.6 细胞复苏 | 第27页 |
| 2.2.7 细胞传代 | 第27页 |
| 2.2.8 细胞冻存 | 第27页 |
| 2.2.9 Transwell细胞侵袭实验 | 第27-28页 |
| 2.2.10 细胞蛋白提取 | 第28页 |
| 2.2.11 蛋白质免疫印迹(Western blot) | 第28-29页 |
| 2.2.12 TR4过表达和敲低质粒的构建 | 第29页 |
| 2.2.13 慢病毒的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.14 慢病毒感染 | 第30页 |
| 2.2.15 细胞总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.16 RNA逆转录成cDNA | 第31页 |
| 2.2.17 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第31页 |
| 2.2.18 统计学方法 | 第31-32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-36页 |
| 2.3.1 TR4在转移性ccRCC组织中高表达 | 第32-33页 |
| 2.3.2 ccRCC患者肾癌组织中TR4的表达量与无复发生存率呈负相关 | 第33页 |
| 2.3.3 ccRCC患者肾癌组织中TR4的表达量与总生存率呈负相关 | 第33页 |
| 2.3.4 侵袭能力较强的ccRCC细胞株TR4表达较高 | 第33-36页 |
| 2.3.5 TR4表达水平对ACHN细胞系和OSRC-2细胞系侵袭能力的影响 | 第36页 |
| 2.4 小结 | 第36-38页 |
| 3 第二部分TR4通过MIR-32-5P/TR4/HGF/MET信号通路促进CCRCC侵袭转移的具体机制研究 | 第38-70页 |
| 3.1 材料和仪器 | 第38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-45页 |
| 3.2.1 染色质免疫共沉淀(Chromatin ImmunoprecipitationAssay,ChIP) | 第38-40页 |
| 3.2.2 双荧光素酶报告基因实验(Dual-Luciferase Reporter Assay) | 第40页 |
| 3.2.3 质粒点突变 | 第40页 |
| 3.2.4 miR-32-5p过表达慢病毒载体的设计 | 第40-41页 |
| 3.2.5 切胶回收目的片段 | 第41页 |
| 3.2.6 感受态大肠杆菌转化 | 第41-42页 |
| 3.2.7 质粒抽提 | 第42-43页 |
| 3.2.8 质粒转染 | 第43-44页 |
| 3.2.9 ccRCC原位移植瘤裸鼠模型的建立 | 第44页 |
| 3.2.10 统计学方法 | 第44-45页 |
| 3.3 实验结果 | 第45-69页 |
| 3.3.1 CCL2/CCR通路和miR-373-3p/TGFβR2/p-Smad3通路不是TR4促进ccRCC侵袭转移的下游通路 | 第45-46页 |
| 3.3.2 TR4可以调控HGF及其下游phospho-Met、MMP2和MMP9的表达 | 第46-48页 |
| 3.3.3 HGF/Met通路介导TR4促进ccRCC侵袭转移 | 第48-49页 |
| 3.3.4 TR4通过结合HGF基因的启动子促进HGF表达 | 第49-53页 |
| 3.3.5 miR-32-5p可以靶向TR4并抑制TR4的表达 | 第53-56页 |
| 3.3.6 miR-32-5p可以抑制ccRCC侵袭转移 | 第56-59页 |
| 3.3.7 miR-32-5p可以抑制TR4/HGF/Met通路 | 第59-60页 |
| 3.3.8 TR4/HGF/Met通路介导miR-32-5p抑制ccRCC侵袭转移 | 第60-64页 |
| 3.3.9 miR-32-5p抑制TR4表达的具体机制 | 第64-65页 |
| 3.3.10 ccRCC原位移植瘤裸鼠模型验证miR-32-5p和TR4在ccRCC侵袭转移中的作用 | 第65-69页 |
| 3.4 小结 | 第69-70页 |
| 4 第三部分TR4通过上调CIRC_000002/MIR-19S-3P/MIR-29S-3P/IGF-1通路促进CCRCC侵袭转移的具体机制研究 | 第70-89页 |
| 4.1 材料和仪器 | 第70页 |
| 4.2 实验方法 | 第70-88页 |
| 4.2.1 设计circ_000002特异性qRT-PCR检测引物并用RNase R验证 | 第70-71页 |
| 4.2.2 构建circ_000002敲低的慢病毒载体 | 第71页 |
| 4.2.3 构建过表达circ_000002的慢病毒载体 | 第71页 |
| 4.2.4 RNA-pull down实验 | 第71-72页 |
| 4.2.5 统计学方法 | 第72页 |
| 4.2.6 实验结果 | 第72页 |
| 4.2.7 TR4可以调控circ_000002的表达 | 第72-75页 |
| 4.2.8 circ_000002敲低和过表达细胞系的建立及鉴定 | 第75-76页 |
| 4.2.9 circ_000002可以促进ccRCC侵袭转移 | 第76-77页 |
| 4.2.10 circ_000002介导TR4对ccRCC侵袭转移的促进作用 | 第77-78页 |
| 4.2.11 TR4调控circ_000002的具体机制 | 第78-82页 |
| 4.2.12 circ_000002可以与miR-19s-3p和miR-29s-3p结合 | 第82-84页 |
| 4.2.13 miR-19s-3p和miR-29s-3p介导circ_000002对ccRCC侵袭转移的促进作用 | 第84-88页 |
| 4.3 小结 | 第88-89页 |
| 5 讨论 | 第89-93页 |
| 6 结论和展望 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-103页 |
| 综述 | 第103-114页 |
| 参考文献 | 第110-114页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第114页 |
