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Asia1型FMDV前导蛋白的BHK-21亚细胞定位及其所致细胞蛋白质组变化研究

摘要第1-4页
ABSTRACT第4-9页
第一章 蛋白质组学及其在动物医学中的应用第9-15页
   ·蛋白组组学常用技术第9-11页
     ·蛋白质的分离技术第9-10页
     ·蛋白质的鉴定技术第10-11页
     ·生物信息学第11页
     ·蛋白质组学研究策略第11页
   ·蛋白质组学在动物医学中的应用研究进展第11-15页
     ·蛋白质组学在动物细菌性疾病研究中的应用第11-12页
     ·蛋白质组学在动物病毒性疾病研究中的应用第12-13页
     ·蛋白质组学在动物寄生虫病研究中的应用第13页
     ·蛋白质组学在动物其他疾病及相关领域研究中的应用第13-14页
     ·展望第14-15页
第二章 口蹄疫病毒前导白蛋(L~(pro))功能研究进展第15-19页
   ·L~(pro) 的结构特征及活性区域第15页
   ·L~(pro) 对宿主蛋白质翻译的影响第15-16页
   ·L~(pro) 是FMDV 主要毒力决定因子之一第16页
   ·L~(pro) 抑制宿主天然免疫应答第16-18页
   ·L~(pro) 与细胞凋亡第18页
   ·L~(pro) 的亚细胞定位特征第18页
   ·展望第18-19页
第三章 亚洲1 型FMDV 前导蛋白亚细胞定位第19-30页
 前言第19页
   ·材料第19-21页
     ·病毒、菌株、细胞、载体第19页
     ·工具酶及要试剂第19-20页
     ·主要仪器第20页
     ·培养基及抗生素的配置第20-21页
   ·方法第21-26页
     ·引物的设计与合成第21页
     ·病毒RNA 提取第21页
     ·目的基因的RT-PCR 扩增第21页
     ·PCR 产物回收第21-22页
     ·目的基因与载体的双酶切第22页
     ·目的基因与真核表达载体的连接第22页
     ·连接产物的转化第22-23页
     ·重组质粒的提取第23页
     ·重组质粒的酶切及PCR 鉴定第23-24页
     ·重组质粒的大量提取及浓度测定第24页
     ·转染第24页
     ·表达产物的荧光检测第24-25页
     ·表达产物的western-blot 分析第25页
     ·PI 核染及亚细胞定位观察第25-26页
   ·结果第26-29页
     ·L~(pro) 基因的RT-PCR 扩增第26页
     ·pEGFPN-L~(pro) 重组质粒的鉴定第26-27页
     ·重组蛋白的荧光检测第27-28页
     ·western blot 分析第28页
     ·L~(pro) 的亚细胞定位第28-29页
   ·讨论第29-30页
第四章 Asia1 型FMDV 前导蛋白致BHK-21 蛋白质组变化研究第30-49页
 前言第30页
   ·材料第30-31页
     ·病毒、菌株、细胞、载体第30页
     ·工具酶及要试剂第30-31页
     ·主要仪器第31页
   ·方法第31-36页
     ·目的基因与载体的双酶切第31页
     ·目的基因与真核表达载体的连接第31-32页
     ·重组质粒的鉴定第32页
     ·重组质粒的大量提取第32页
     ·转染及样品制备第32页
     ·表达产物的RT-PCR 检测第32页
     ·表达产物的Western blot 分析第32页
     ·第一向IEF第32-33页
     ·第二向SDS-PAGE第33-34页
     ·凝胶染色第34-35页
     ·图像扫描和分析第35页
     ·胶内酶切与质谱鉴定第35-36页
     ·鉴定蛋白的生物信息学分析第36页
   ·结果第36-48页
     ·重组质粒pCDNA-L~(pro) 的鉴定第36页
     ·表达产物的RT-PCR 检测第36-37页
     ·western blot 分析第37页
     ·2-DE 图谱第37-38页
     ·2-DE 图谱分析第38-40页
     ·蛋白鉴定第40-44页
     ·鉴定蛋白的注释及生物信息学分析第44-48页
   ·讨论第48-49页
第五章 结论第49-50页
参考文献第50-57页
附录第57-62页
致谢第62-63页
作者简介第63页
硕士期间文章发表情况第63-64页
导师简介第64页

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