| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 综述 | 第12-21页 |
| 1 摩拉和尼里-拉菲水牛简介 | 第12-13页 |
| 2 评价水牛精液品质的指标 | 第13-15页 |
| 2.1 精子活率 | 第13-14页 |
| 2.2 精子质膜的完整性 | 第14页 |
| 2.3 精子畸形率 | 第14-15页 |
| 3 影响水牛精液品质的因素 | 第15-16页 |
| 3.1 季节对水牛精液品质的影响 | 第15页 |
| 3.2 品种对水牛精液品质的影响 | 第15-16页 |
| 3.3 年龄对水牛精液品质的影响 | 第16页 |
| 4 HSP70蛋白对水牛精液品质的影响 | 第16-18页 |
| 4.1 热应激蛋白家族 | 第16-17页 |
| 4.2 SHP70蛋白的功能 | 第17-18页 |
| 4.2.1 分子伴侣 | 第17页 |
| 4.2.2 抗细胞凋亡作用 | 第17-18页 |
| 4.2.3 HSP70与精子生成 | 第18页 |
| 5 精液酶活力与精液品质 | 第18-19页 |
| 5.1 顶体酶 | 第18页 |
| 5.2 酸性磷酸酶 | 第18-19页 |
| 5.3 精浆弹性蛋白酶 | 第19页 |
| 5.4 精浆α-葡萄糖苷酶 | 第19页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 品种、年龄、气温对摩拉和尼里-拉菲水牛精液品质的影响 | 第21-31页 |
| 1 试验材料 | 第21-22页 |
| 1.1 试验材料 | 第21页 |
| 1.2 仪器 | 第21页 |
| 1.3 试验试剂 | 第21-22页 |
| 2 试验方法 | 第22-23页 |
| 2.1. 精液的采集 | 第22页 |
| 2.2 精液品质指标的测定 | 第22-23页 |
| 2.2.1 精液精子密度的测定 | 第22页 |
| 2.2.2 检查精子的活力 | 第22页 |
| 2.2.3 检查精子密度 | 第22-23页 |
| 2.2.4 精子冻精管的制作与冻后活力的测定 | 第23页 |
| 2.3 数据分析 | 第23页 |
| 3 试验结果 | 第23-27页 |
| 3.1 品种对种公牛精液品质的影响 | 第23-24页 |
| 3.2 年龄对种公牛精液品质的影响 | 第24-26页 |
| 3.3 气温对种公牛精液品质的影响 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-31页 |
| 4.1 品种对公牛精液品质的影响 | 第27-28页 |
| 4.2 年龄对公牛精液品质的影响 | 第28-29页 |
| 4.3 气温对公牛精液品质的影响 | 第29-31页 |
| 第三章 HSP70基因多态性与公牛精液品质的相关性分析 | 第31-46页 |
| 1 试验材料 | 第31-32页 |
| 1.1 试验动物 | 第31页 |
| 1.2 仪器 | 第31-32页 |
| 1.3 试剂 | 第32页 |
| 2 试验方法 | 第32-35页 |
| 2.1 HSP70基因CDs区的克隆 | 第32-34页 |
| 2.1.1 DNA的提取 | 第32页 |
| 2.1.2 引物的设计与合成 | 第32页 |
| 2.1.3 PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.1.4 克隆与测序 | 第33页 |
| 2.1.5 测序结果 | 第33-34页 |
| 2.2 HSP70基因多态性的检测 | 第34页 |
| 2.2.1 DNA池的制备 | 第34页 |
| 2.2.2 DNA池PCR扩增 | 第34页 |
| 2.2.3 SNP位点的筛选 | 第34页 |
| 2.2.4 HRM基因分型 | 第34页 |
| 2.3 数据处理与分析 | 第34-35页 |
| 3 试验结果 | 第35-44页 |
| 3.1 基因克隆 | 第35-37页 |
| 3.1.1 DNA的提取与鉴定 | 第35页 |
| 3.1.2 克隆测序结果 | 第35-37页 |
| 3.1.3 HSP70基因进化树 | 第37页 |
| 3.2 摩拉与尼里拉菲水牛HSP70基因CDs区多态性检测结果 | 第37-40页 |
| 3.2.1 DNA池PCR扩增产物测序结果 | 第37-39页 |
| 3.2.2 HRM基因型分型结果 | 第39-40页 |
| 3.3 HSP70基因多态性与精液品质相关性分析 | 第40-44页 |
| 3.3.1 群体遗传结构分析 | 第40-41页 |
| 3.3.2 Hardy-Weinberg平衡检验 | 第41-42页 |
| 3.3.3 HSP70基因多态性与公牛精液品质相关性分析 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 精液品质相关酶活力和蛋白质表达量关系的研究 | 第46-56页 |
| 1 试验材料和仪器 | 第46-47页 |
| 1.1 试验材料 | 第46页 |
| 1.2 试剂 | 第46-47页 |
| 1.3 仪器 | 第47页 |
| 2 试验方法 | 第47-49页 |
| 2.1 精液酶活力的测定 | 第47页 |
| 2.3 总蛋白的提取与相关蛋白Western blot分析 | 第47-49页 |
| 2.3.1 精液总蛋白质提取 | 第47-48页 |
| 2.3.2 样品总蛋白含量的测定 | 第48页 |
| 2.3.4 变性 | 第48页 |
| 2.3.5 Western Blotting | 第48-49页 |
| 3 试验结果 | 第49-54页 |
| 3.1 精子活力的测定结果 | 第49-50页 |
| 3.2 精液酶活力的测定结果 | 第50-51页 |
| 3.3 Western Blotting分析分析结果 | 第51-54页 |
| 3.3.1 总蛋白的提取 | 第51页 |
| 3.3.2 HSP60和HSP70蛋白的Western Blotting结果 | 第51-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 4.1 精液相关酶活力对精液品质的影响 | 第54页 |
| 4.2 公牛精液蛋白WB检测 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第63页 |
