| 中文摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第15-20页 |
| 1.1 PRL的功能研究进展 | 第15-18页 |
| 1.1.1 PRL对哺乳动物繁殖调控的研究 | 第15-16页 |
| 1.1.2 PRL对禽类繁殖调控的研究 | 第16-17页 |
| 1.1.3 PRL在鹅繁殖调控研究中的作用 | 第17-18页 |
| 1.2 PRL调节及作用方式 | 第18-19页 |
| 1.3 PRL测定方法的研究 | 第19页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-46页 |
| 2.1 材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 主要实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.3 培养基的配制 | 第22页 |
| 2.1.4 其他实验相关溶液的配制 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-46页 |
| 2.2.1 鹅PRLR基因的克隆 | 第23-26页 |
| 2.2.2 pCMV6-PRLR-His-Entry重组载体的构建 | 第26-30页 |
| 2.2.3 pCMV6-PRLR-His-Entry重组载体在HEK293T细胞的瞬时转染 | 第30-32页 |
| 2.2.4 Western-blot验证PRLR-His的表达 | 第32-34页 |
| 2.2.5 pCMV6-PRLR-Entry重组表达载体的构建 | 第34-36页 |
| 2.2.6 重组STAT5双荧光素酶报告载体无内毒素质粒的制备 | 第36页 |
| 2.2.7 筛选基因载体pEZX-MR03、内参载体pRL-TK、pCMV6-Entry载体和pGL3-Enhancer载体无内毒素质粒的制备 | 第36页 |
| 2.2.8 质粒pCMV6-PRLR-Entry、pRL-TK和pGL3-(STAT5)5-Enhancer在HEK293T细胞的瞬时转染 | 第36-38页 |
| 2.2.9 转染细胞中荧光素酶相对活性的检测 | 第38页 |
| 2.2.10 质粒pCMV6-PRLR-Entry、p GL3-(STAT5)5-Enhancer和pEZX-MR03在HEK293T细胞的稳定转染 | 第38-40页 |
| 2.2.11 转基因细胞的单克隆筛选 | 第40-42页 |
| 2.2.12 单克隆细胞株Luc活性的检测 | 第42-43页 |
| 2.2.13 普通PCR检测单克隆细胞株Luc基因的表达 | 第43-44页 |
| 2.2.14 荧光实时定量PCR测定单克隆细胞株Luc基因的表达 | 第44-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-55页 |
| 3.1 鹅PRLR CDS PCR电泳图 | 第46页 |
| 3.2 鹅PRLR-His PCR电泳图 | 第46-47页 |
| 3.3 鹅PRLR-His双酶切胶回收电泳图 | 第47页 |
| 3.4 pCMV6-PRLR-His-Entry重组载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.5 pCMV6-PRLR-His-Entry的双酶切验证 | 第48页 |
| 3.6 Western-blot验证PRLR-His在HEK293T细胞的表达 | 第48-49页 |
| 3.7 pCMV6-PRLR-Entry和pGL3-(STAT5)5-Enhancer载体的构建 | 第49页 |
| 3.8 pCMV6-PRLR-Entry和pGL3-(STAT5)5-Enhancer质粒DNA双酶切电泳图 | 第49-50页 |
| 3.9 瞬时转染的HEK293T细胞中Luc相对活性随PRL浓度的变化 | 第50-51页 |
| 3.10 转基因细胞的制备 | 第51-52页 |
| 3.11 转基因单克隆细胞的鉴定 | 第52页 |
| 3.12 普通PCR验证单克隆细胞株转基因的表达 | 第52-53页 |
| 3.13 单克隆细胞株对PRL应答的检测 | 第53页 |
| 3.14 单克隆细胞株Luc活性的检测 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 4.1 PRLR结构 | 第55-56页 |
| 4.2 鹅PRLR表达的验证 | 第56页 |
| 4.3 PRLR-JAK-STAT通路 | 第56-57页 |
| 4.4 瞬时转染细胞验证通路应答反应 | 第57-58页 |
| 4.5 转基因单克隆细胞株的筛选 | 第58-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 6 参考文献 | 第60-66页 |
| 7 致谢 | 第66-67页 |
| 8 攻读学位期间发表论文情况及著作 | 第67页 |
