| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一章 引言 | 第14-25页 |
| 1 蜜蜂疾病 | 第14-20页 |
| 1.1 影响全球蜜蜂锐减的主要疾病 | 第14-16页 |
| 1.1.1 蜜蜂螨病 | 第14-15页 |
| 1.1.2 蜜蜂病毒病 | 第15-16页 |
| 1.1.3 孢子虫病 | 第16页 |
| 1.2 蜜蜂白垩病 | 第16-20页 |
| 1.2.1 白垩病发生及地理分布 | 第16-17页 |
| 1.2.2 球囊菌形态特征 | 第17-18页 |
| 1.2.3 球囊菌属分类学 | 第18页 |
| 1.2.4 蜜蜂白垩病的防治方法 | 第18-19页 |
| 1.2.5 蜜蜂白垩病研究技术 | 第19-20页 |
| 2 蜜蜂抵御病原的机制 | 第20-23页 |
| 2.1 群体水平的防御 | 第21页 |
| 2.2 个体水平的防御 | 第21-22页 |
| 2.3 蜜蜂抵御球囊菌的机制 | 第22-23页 |
| 2.3.1 行为上防御 | 第22页 |
| 2.3.2 免疫防御 | 第22-23页 |
| 3 高通量测序技术及昆虫研究中的应用 | 第23-24页 |
| 3.1 高通量测序技术 | 第23页 |
| 3.2 转录组学 | 第23-24页 |
| 4 研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 中华蜜蜂白垩状幼虫尸体病原的分离培养与鉴定 | 第25-39页 |
| 1 材料和方法 | 第25-31页 |
| 1.1 主要试剂 | 第25页 |
| 1.2 试验设备 | 第25-26页 |
| 1.3 试验方法 | 第26-31页 |
| 1.3.1 意蜂及中蜂幼虫尸体病原的分离及纯化 | 第26页 |
| 1.3.2 中蜂白垩状幼虫尸体分离病原的杂交产孢 | 第26页 |
| 1.3.3 中蜂白垩状幼虫尸体分离病原的形态学观察 | 第26-27页 |
| 1.3.4 PCR鉴定及分子克隆 | 第27-29页 |
| 1.3.5 构建系统进化树 | 第29-30页 |
| 1.3.6 分离病原的交叉感染幼虫实验 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-38页 |
| 2.1 球囊菌的活化 | 第31-32页 |
| 2.2 中蜂白垩状虫尸的病原分离和杂交产孢 | 第32-33页 |
| 2.3 病原真菌的显微镜观察结果 | 第33-34页 |
| 2.4 扫描电镜观察 | 第34-35页 |
| 2.5 PCR扩增及系统进化树的构建 | 第35-37页 |
| 2.6 病原的交叉感染及病虫病原的PCR鉴定 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-39页 |
| 第三章 中华蜜蜂幼虫肠道参考转录组的de novo组装及SSR分子标记开发 | 第39-57页 |
| 1 材料与方法 | 第39-43页 |
| 1.1 材料 | 第39-40页 |
| 1.1.1 生物材料 | 第39-40页 |
| 1.1.2 试剂 | 第40页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第40页 |
| 1.2 实验方法 | 第40-43页 |
| 1.2.1 中华蜜蜂幼虫的人工饲养实验 | 第40-41页 |
| 1.2.2 测序样品准备 | 第41页 |
| 1.2.3 cDNA文库构建及RNA-seq | 第41页 |
| 1.2.4 中蜂幼虫肠道参考转录组的de novo组装 | 第41页 |
| 1.2.5 Unigenes注释 | 第41-42页 |
| 1.2.6 SSR分子标记开发 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-55页 |
| 2.1 RNA-seq与中蜂幼虫肠道unigenes组装 | 第43-45页 |
| 2.2 Unigenes注释 | 第45-47页 |
| 2.3 Unigenes的Gene Ontology(GO)分类 | 第47-49页 |
| 2.4 Unigenes的KEGG代谢通路注释 | 第49-51页 |
| 2.5 SSR分子标记鉴定 | 第51-55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 中蜂幼虫肠道响应球囊菌胁迫的免疫应答研究 | 第57-77页 |
| 1 材料和方法 | 第57-60页 |
| 1.1 实验材料 | 第57页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第57-58页 |
| 1.2.1 实验仪器 | 第57-58页 |
| 1.3 试验方法 | 第58-60页 |
| 1.3.1 球囊菌孢子活化及测序样品准备 | 第58页 |
| 1.3.2 中蜂幼虫肠道总RNA的提取 | 第58页 |
| 1.3.3 浓缩mRNA | 第58页 |
| 1.3.4 cDNA的合成及RNA-seq | 第58-59页 |
| 1.3.5 测序数据的处理和分析 | 第59页 |
| 1.3.6 Real-time quantative PCR(RT-qPCR)验证 | 第59-60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-74页 |
| 2.1 RNA-seq数据质控与评估 | 第60-62页 |
| 2.2 Clean reads比对中蜂幼虫肠道参考转录组 | 第62-63页 |
| 2.3 DEGs分析 | 第63-73页 |
| 2.3.1 DEGs的趋势分析 | 第64-67页 |
| 2.3.2 DEGs的GO功能富集分析 | 第67-68页 |
| 2.3.3 DEGs的KEGG pathway富集分析 | 第68-71页 |
| 2.3.4 免疫相关通路富集基因分析 | 第71-73页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR对RNA-seq数据的验证 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-77页 |
| 第五章 意蜂幼虫肠道响应球囊菌胁迫的免疫应答研究 | 第77-98页 |
| 1 材料和方法 | 第77-79页 |
| 1.1 实验材料 | 第77-78页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第78页 |
| 1.3 试验方法 | 第78-79页 |
| 1.3.1 测序数据的处理和分析 | 第78-79页 |
| 1.3.2 Real-time PCR | 第79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-95页 |
| 2.1 意大利蜜蜂幼虫肠道Illumina测序数据概况 | 第79-83页 |
| 2.2 DEGs分析 | 第83-86页 |
| 2.2.1 对照组和处理组间DEGs分析 | 第83-84页 |
| 2.2.2 DEGs的趋势分析 | 第84-86页 |
| 2.3 DEGs的GO功能分类和KEGG代谢通路富集分析 | 第86-94页 |
| 2.3.1 DEGs的GO功能分类 | 第86-89页 |
| 2.3.2 DEGs的KEGG代谢通路富集分析 | 第89-94页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR对RNA-seq数据的验证 | 第94-95页 |
| 3 讨论 | 第95-98页 |
| 第六章 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-110页 |
| 附录 | 第110-129页 |
| 攻读学位期间的学术论文与研究成果 | 第129-130页 |
| 致谢 | 第130页 |
