| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一章 红花查尔酮异构酶基因的克隆及生物信息学分析 | 第14-30页 |
| 1.1 材料、试剂与仪器 | 第14-17页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第14-16页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第16-17页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第17页 |
| 1.2 红花总RNA的提取和逆转录 | 第17-19页 |
| 1.2.1 红花总RNA的提取 | 第17-18页 |
| 1.2.2 红花总RNA的完整性检测 | 第18-19页 |
| 1.2.2.1 50×TAE缓冲液的制备 | 第18页 |
| 1.2.2.2 电泳缓冲液的制备 | 第18页 |
| 1.2.2.3 2%琼脂糖凝胶的制备 | 第18页 |
| 1.2.2.4 凝胶电泳检测 | 第18-19页 |
| 1.2.3 逆转录反应 | 第19页 |
| 1.3 红花CHI的克隆 | 第19-22页 |
| 1.3.1 红花总RNA的提取和cDNA的合成 | 第20页 |
| 1.3.2 CHI的引物设计 | 第20页 |
| 1.3.3 CHI的PCR扩增 | 第20-21页 |
| 1.3.4 PCR产物的凝胶电泳检测 | 第21-22页 |
| 1.3.5 PCR产物测序 | 第22页 |
| 1.4 红花CHI的生物信息学分析 | 第22-28页 |
| 1.4.1 CHI的一级结构预测 | 第24-26页 |
| 1.4.2 CHI的二级结构预测 | 第26-27页 |
| 1.4.3 CHI的三级结构预测 | 第27页 |
| 1.4.4 CHI的系统进化树构建 | 第27-28页 |
| 1.5 小结 | 第28-30页 |
| 第二章 红花查尔酮异构酶基因的表达分析 | 第30-56页 |
| 2.1 材料、试剂与仪器 | 第30-32页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第30页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第31-32页 |
| 2.2 开花期CHI的表达谱分析 | 第32-41页 |
| 2.2.1 红花样品总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第32页 |
| 2.2.2 开花期CHI荧光定量PCR检测 | 第32-36页 |
| 2.2.2.1 引物设计及PCR检测 | 第32-34页 |
| 2.2.2.2 扩增曲线 | 第34页 |
| 2.2.2.3 溶解曲线 | 第34-35页 |
| 2.2.2.4 标准曲线 | 第35页 |
| 2.2.2.5 cq值 | 第35-36页 |
| 2.2.3 开花期参考基因荧光定量PCR检测 | 第36-40页 |
| 2.2.3.1 内参基因PCR检测 | 第37页 |
| 2.2.3.2 扩增曲线 | 第37-38页 |
| 2.2.3.3 溶解曲线 | 第38页 |
| 2.2.3.4 标准曲线 | 第38-39页 |
| 2.2.3.5 cq值 | 第39-40页 |
| 2.2.4 开花期CHI的相对表达量 | 第40-41页 |
| 2.3 CHI的原核表达分析 | 第41-50页 |
| 2.3.1 LB培养基配制 | 第41-42页 |
| 2.3.2 构建重组T载体 | 第42-43页 |
| 2.3.2.1 酶切位点分析及引物设计 | 第42页 |
| 2.3.2.2 目的基因的获得 | 第42-43页 |
| 2.3.2.3 目的基因连接T载体 | 第43页 |
| 2.3.3 大肠杆菌DH5a菌株的活化、制备及转化 | 第43-44页 |
| 2.3.3.1 大肠杆菌DH5a的活化 | 第43页 |
| 2.3.3.2 感受态大肠杆菌DH5a的制备 | 第43-44页 |
| 2.3.3.3 大肠杆菌DH5a的转化 | 第44页 |
| 2.3.4 T质粒的回收 | 第44-46页 |
| 2.3.4.1 转化DH5a目的基因检测 | 第44-45页 |
| 2.3.4.2 转化DH5a菌液扩大培养 | 第45-46页 |
| 2.3.4.3 T质粒的回收 | 第46页 |
| 2.3.5 T质粒及表达载体的酶切 | 第46-47页 |
| 2.3.5.1 质粒的酶切 | 第46页 |
| 2.3.5.2 表达载体的酶切 | 第46-47页 |
| 2.3.5.3 凝胶检测酶切结果 | 第47页 |
| 2.3.6 构建重组表达载体 | 第47-48页 |
| 2.3.7 ROS菌株的活化、感受态制备及转化 | 第48页 |
| 2.3.8 PET_(32)质粒的回收 | 第48-49页 |
| 2.3.8.1 转化ROS目的基因检测 | 第48页 |
| 2.3.8.2 转化ROS菌液扩大培养 | 第48页 |
| 2.3.8.3 PET_(32)质粒的回收 | 第48-49页 |
| 2.3.9 PET_(32)质粒的酶切检测 | 第49-50页 |
| 2.4 CHI的SDS-PAGE分析 | 第50-54页 |
| 2.4.1 重组载体测序 | 第50页 |
| 2.4.2 溶液的配制 | 第50-52页 |
| 2.4.2.1 IPTG溶液的配制 | 第50页 |
| 2.4.2.2 上样缓冲液的分装 | 第50-51页 |
| 2.4.2.3 电泳缓冲液的配制 | 第51页 |
| 2.4.2.4 考马斯亮蓝染液的配制 | 第51页 |
| 2.4.2.5 考马斯亮蓝脱色液的配制 | 第51-52页 |
| 2.4.3 SDS-PAGE | 第52-54页 |
| 2.4.3.1 凝胶制备 | 第52页 |
| 2.4.3.2 重组CHI样品制备 | 第52-53页 |
| 2.4.3.3 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第53页 |
| 2.4.3.4 考马斯亮蓝R-250染色 | 第53页 |
| 2.4.3.5 考马斯亮蓝脱色 | 第53页 |
| 2.4.3.6 重组CHI SDS-PAGE结果 | 第53-54页 |
| 2.5 小结 | 第54-56页 |
| 第三章 红花水分、颜色及黄酮类成分测定 | 第56-70页 |
| 3.1 材料、试剂与仪器 | 第56页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第56页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第56页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第56页 |
| 3.2 红花水分及颜色测定 | 第56-61页 |
| 3.2.1 红花的水分测定 | 第56-57页 |
| 3.2.2 红花的颜色测定 | 第57-61页 |
| 3.2.2.1 红花粉末颜色测定 | 第58-59页 |
| 3.2.2.2 红花60%甲醇提取溶液的颜色测定 | 第59-60页 |
| 3.2.2.3 红花25%甲醇提取溶液的颜色测定 | 第60-61页 |
| 3.3 红花总黄酮的含量测定 | 第61-65页 |
| 3.3.1 对照品溶液的制备 | 第61页 |
| 3.3.2 供试品溶液的制备 | 第61页 |
| 3.3.3 方法学考察 | 第61-64页 |
| 3.3.3.1 标准曲线的制备 | 第61-62页 |
| 3.3.3.2 精密度试验 | 第62-63页 |
| 3.3.3.3 稳定性试验 | 第63页 |
| 3.3.3.4 重复性试验 | 第63页 |
| 3.3.3.5 加样回收试验 | 第63-64页 |
| 3.3.4 红花总黄酮的含量测定结果 | 第64-65页 |
| 3.4 羟基红花黄色素A的累积分析 | 第65-68页 |
| 3.4.1 对照品溶液的制备 | 第65页 |
| 3.4.2 供试品溶液的制备 | 第65页 |
| 3.4.3 色谱条件 | 第65页 |
| 3.4.4 方法学考察 | 第65-67页 |
| 3.4.4.1 标准曲线的制备 | 第65-66页 |
| 3.4.4.2 精密度试验 | 第66页 |
| 3.4.4.3 稳定性试验 | 第66页 |
| 3.4.4.4 加样回收试验 | 第66-67页 |
| 3.4.5 羟基红花黄色素A的含量测定结果 | 第67-68页 |
| 3.5 小结 | 第68-70页 |
| 3.5.1 红花的水分检测 | 第68页 |
| 3.5.2 红花的颜色检测 | 第68-69页 |
| 3.5.3 红花的成分检测 | 第69-70页 |
| 第四章 生物量-成分含量-基因表达的分析 | 第70-78页 |
| 4.1 生物量-成分的关系 | 第70-72页 |
| 4.2 黄酮类成分含量在花色上的表现 | 第72-75页 |
| 4.2.1 DPS分析黄酮类与花色关联性 | 第72-73页 |
| 4.2.2 AMOS分析黄酮类与花色关联性 | 第73-74页 |
| 4.2.3 黄酮类成分与花色相关性 | 第74-75页 |
| 4.3 CHI表达与黄酮类成分累积的关联 | 第75-77页 |
| 4.4 小结 | 第77-78页 |
| 第五章 总结与展望 | 第78-81页 |
| 5.1 CHI的克隆及生物信息学分析 | 第78页 |
| 5.2 CHI的表达分析 | 第78-79页 |
| 5.3 水分、颜色及黄酮类成分的测定 | 第79页 |
| 5.4 红花生物量-成分含量-基因表达的分析 | 第79-80页 |
| 5.5 展望 | 第80-81页 |
| 综述 | 第81-91页 |
| 1 红花概述 | 第81-82页 |
| 1.1 红花起源与分布 | 第81页 |
| 1.2 红花应用状况 | 第81-82页 |
| 2 红花黄酮类合成研究进展 | 第82-90页 |
| 2.1 黄酮类成分研究进展 | 第82-87页 |
| 2.2 红花黄酮类合成途径研究进展 | 第87-89页 |
| 2.3 查尔酮异构酶基因研究进展 | 第89-90页 |
| 3 小结 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果 | 第97-98页 |
