内含肽介导的重组酶Cre拆分及其在拟南芥中的删除活性研究
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-24页 |
| ·植物转基因技术概况 | 第10-11页 |
| ·转基因植物安全性问题及解决途径 | 第11-14页 |
| ·转基因植物生物安全性问题 | 第11-12页 |
| ·解决途径 | 第12-14页 |
| ·位点特异性重组酶系统 | 第14-16页 |
| ·研究现状 | 第14页 |
| ·Cre/loxp系统作用原理及应用 | 第14-16页 |
| ·内含肽介导的蛋白拆分技术研究进展 | 第16-24页 |
| ·内含肽概述 | 第17-18页 |
| ·内含肽的作用机理及应用 | 第18-21页 |
| ·Ssp DnaE intein | 第21-24页 |
| 第2章 引言 | 第24-26页 |
| ·研究目标 | 第24页 |
| ·研究内容 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 第3章 材料与方法 | 第26-40页 |
| ·材料 | 第26-29页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·购买的试剂及试剂盒 | 第26-27页 |
| ·抗生素与激素 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·其它试剂的配制 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-40页 |
| ·质粒提取(碱裂解法) | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备和转化 | 第30页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备和转化 | 第30-31页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第31-34页 |
| ·烟草遗传转化 | 第34页 |
| ·转基因烟草毛状根的分子鉴定 | 第34-35页 |
| ·转基因烟草毛状根的GUS组织染色 | 第35页 |
| ·删除效应测序分析 | 第35页 |
| ·拟南芥的遗传转化 | 第35-36页 |
| ·转基因拟南芥单拷贝纯合体的筛选 | 第36页 |
| ·拟南芥叶片总RNA的提取 | 第36-37页 |
| ·拟南芥GUS染色 | 第37页 |
| ·GUS酶活性的定量分析 | 第37-38页 |
| ·拟南芥的杂交方法 | 第38-40页 |
| 第4章 结果与分析 | 第40-56页 |
| ·重组酶CRE蛋白结构分析及拆分位点确定 | 第40页 |
| ·拆分系统在烟草发根中的删除效率研究 | 第40-45页 |
| ·拆分系统植物表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·转基因毛状根的PCR检测 | 第41-42页 |
| ·毛状根GUS染色分析 | 第42-43页 |
| ·拆分系统删除效率统计 | 第43-44页 |
| ·测序分析 | 第44-45页 |
| ·拆分系统在拟南芥中的删除活性分析 | 第45-50页 |
| ·单拷贝转基因拟南芥的获得 | 第45-46页 |
| ·拟南芥GUS染色分析 | 第46-47页 |
| ·拟南芥GUS活性分析 | 第47-50页 |
| ·拆分系统在拟南芥杂交中的删除活性研究 | 第50-56页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第50页 |
| ·转基因拟南芥单拷贝纯合体的获得 | 第50-53页 |
| ·杂交后代GUS染色分析 | 第53-56页 |
| 第5章 结论与讨论 | 第56-58页 |
| ·结论 | 第56-57页 |
| ·重组酶Cre的不同拆分位点的确定 | 第56页 |
| ·拆分系统在烟草发根中的删除效率 | 第56页 |
| ·拆分系统在拟南芥中的删除活性分析 | 第56-57页 |
| ·拆分系统在拟南芥杂交中的删除活性 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
