猪传染性胃肠炎病毒N基因的荧光定量PCR检测方法建立及初步应用
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第8-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-28页 |
| 1. 猪传染性胃肠炎病毒研究进展 | 第12-21页 |
| ·猪传染性胃肠炎的历史、流行及危害 | 第12-13页 |
| ·TGEV病原学特点 | 第13-15页 |
| ·TGE的流行病学、致病性及表现形式 | 第15-17页 |
| ·TGEV的分子生物学 | 第17-21页 |
| 2. 猪传染性胃肠炎常见临床检测技术 | 第21-25页 |
| ·中和试验 | 第21页 |
| ·免疫荧光法和免疫过氧化物酶技术 | 第21-22页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第22页 |
| ·基因芯片技术 | 第22-23页 |
| ·限制性酶切片段长度多态性分析 | 第23页 |
| ·环介导等温扩增技术 | 第23-24页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第24-25页 |
| 3. 实时荧光定量PCR技术 | 第25-27页 |
| ·优点及分类 | 第26页 |
| ·荧光定量PCR的应用 | 第26-27页 |
| 4.本研究的目的与意义 | 第27-28页 |
| 第二部分 实验研究内容 | 第28-50页 |
| 1. 材料 | 第28-29页 |
| ·病毒及主要试剂与材料 | 第28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28页 |
| ·主要试剂配制 | 第28-29页 |
| 2. 方法 | 第29-36页 |
| ·荧光定量PCR引物设计 | 第29页 |
| ·病毒RNA的提取及cDNA的合成 | 第29-31页 |
| ·常规PCR鉴定 | 第31页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第31-32页 |
| ·产物的连接与转化 | 第32-33页 |
| ·荧光定量PCR标准品的制备及退火温度的优化 | 第33-34页 |
| ·荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第34页 |
| ·荧光定量PCR的特异性 | 第34页 |
| ·荧光定量PCR的重复性 | 第34-35页 |
| ·荧光定量PCR的敏感性 | 第35页 |
| ·荧光定量PCR临床样品检测 | 第35页 |
| ·TGEV疫苗病毒的含量检测 | 第35-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-46页 |
| ·扩增目的片段PCR鉴定结果 | 第36页 |
| ·菌液PCR结果 | 第36-37页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第37-38页 |
| ·荧光定量PCR退火温度优化结果 | 第38页 |
| ·标准品的选择及荧光定量PCR标准曲线的制作 | 第38-39页 |
| ·荧光定量PCR特异性试验结果 | 第39-40页 |
| ·荧光定量PCR重复性试验结果 | 第40-41页 |
| ·荧光定量PCR敏感性试验结果 | 第41-42页 |
| ·荧光定量PCR临床病料检测结果 | 第42-45页 |
| ·TGEV商品疫苗病毒含量的抽检 | 第45-46页 |
| 4. 讨论 | 第46-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-62页 |
