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普通油茶花发育和遗传转化体系构建初步研究

摘要第1-8页
Abstract第8-24页
第一章 绪论第24-39页
   ·引言第24-26页
     ·研究背景第24-25页
     ·研究目的和意义第25-26页
     ·项目来源与经费支持第26页
   ·国内外研究现状与评述第26-37页
     ·植物成花研究第26-29页
     ·植物成花调控研究第29-30页
     ·遗传转化体系研究进展第30-31页
     ·油茶栽培和育种相关研究第31-35页
     ·油茶花发育相关研究第35-37页
   ·研究目标和主要研究内容第37-38页
     ·研究目标第37页
     ·研究内容第37-38页
   ·技术路线第38-39页
第二章 普通油茶花芽分化过程春梢生理变化研究第39-56页
   ·材料与方法第39-40页
     ·试验地介绍第39页
     ·试验材料第39-40页
     ·采样方法第40页
     ·测定指标及方法第40页
     ·数据统计和分析第40页
   ·结果与分析第40-52页
     ·花芽分化过程春梢生长变化第40-41页
     ·花芽分化过程春梢不同部位器官氮碳化合物含量变化第41-44页
     ·花芽分化过程春梢的不同部位器官内源激素含量变化第44-48页
     ·花芽分化过程春梢不同部位器官中激素含量对比分析第48-52页
   ·小结第52-53页
   ·讨论第53-56页
     ·春梢生长变化第53页
     ·春梢中可溶性蛋白和碳水化合物含量变化第53-54页
     ·春梢中内源激素含量变化第54-56页
第三章 普通油茶花器官形成过程春梢生理变化第56-71页
   ·材料与方法第56-57页
     ·试验材料第56页
     ·采样方法第56-57页
     ·测定指标及方法第57页
     ·数据统计和分析第57页
   ·结果与分析第57-68页
     ·花芽发育过程形态变化第57-58页
     ·花芽在不同发育时期相关生理指标变化第58-61页
     ·花器官发育期内源激素含量变化第61-65页
     ·花器官发育期各种内源激素动态平衡分析第65-68页
   ·小结第68-69页
   ·讨论第69-71页
     ·花芽发育过程形态变化第69页
     ·春梢中可溶性蛋白和碳水化合物含量变化第69-70页
     ·春梢中内源激素含量变化第70-71页
第四章 主要环境因子对普通油茶成花影响第71-90页
   ·材料与方法第71-75页
     ·试验材料第71页
     ·试验方法第71-72页
     ·采样方法和测定指标第72页
     ·RNA 提取第72-73页
     ·RNA 质量鉴定第73页
     ·cDNA 第一链合成第73-74页
     ·qRT-PCR 反应第74-75页
   ·结果与分析第75-86页
     ·花芽分化期不同器官碳氮化合物含量差异比较第75-78页
     ·花芽分化期不同器官植物内源激素含量和不同激素间对比变化第78-83页
     ·花芽分化期春梢茎尖花发育相关基因表达第83-84页
     ·花芽发育进程的影响第84-85页
     ·环境因素对成花的影响第85-86页
   ·小结第86-87页
   ·讨论第87-90页
     ·环境因素对普通油茶花芽分化的影响第87-88页
     ·成花相关基因与油茶成花的关系第88-89页
     ·环境因素对普通油茶花发育的影响第89-90页
第五章 油茶花芽发育转录组测序与花发育基因表达分析第90-104页
   ·材料与方法第90-93页
     ·试验材料与试剂第90页
     ·采样方法第90-91页
     ·RNA 提取第91页
     ·转录组上机测序样品的制备第91页
     ·qRT-PCR第91-92页
     ·转录组测序数据处理与分析第92-93页
   ·结果与分析第93-101页
     ·转录组分析第93-99页
     ·成花相关基因在花芽分化过程表达分析第99-100页
     ·成花相关基因在花器官形成过程表达分析第100-101页
   ·小结第101页
   ·讨论第101-104页
     ·转录组测序分析第101-102页
     ·成花相关基因表达分析第102页
     ·普通油茶成花途径及成花关键基因分析第102-104页
第六章 油茶花发育过程数字表达谱测序和分析第104-137页
   ·试验材料与方法第105-106页
     ·试验材料第105页
     ·采样和 RNA 提取方法第105页
     ·上机测序前准备和方法第105页
     ·生物信息学分析第105-106页
   ·结果与分析第106-135页
     ·表达谱测序第106-112页
     ·差异表达基因分析第112-113页
     ·差异表达基因生物信息学分析第113-130页
     ·影响成花可能代谢途经 unigene 数量分析第130-131页
     ·花芽分化期淀粉和蔗糖代谢 Kegg pathway 及相关 Unigene 表达量分析第131-133页
     ·花器官形成相关 unigenes 表达第133-134页
     ·普通油茶成花过程基因表达模式第134-135页
   ·小结第135页
   ·讨论第135-137页
     ·数字表达谱测序第135-136页
     ·生物信息学分析第136页
     ·成花途径预测第136-137页
第七章 花发育相关基因 FT、PI 克隆及遗传转载体构建第137-156页
   ·材料、试剂与设备第137-139页
     ·材料第137-138页
     ·试剂第138页
     ·仪器设备第138-139页
   ·实验方法第139-145页
     ·LB 培养基制备第139页
     ·引物设计第139-140页
     ·总 RNA 提取和鉴定第140页
     ·cDNA 第一链合成第140页
     ·普通油茶 FT 和 PI 基因分离第140页
     ·电泳检测第140页
     ·目的片段的回收第140-141页
     ·目的片段与 pMD18-T 载体连接第141-142页
     ·菌落 PCR 检测第142页
     ·质粒 DNA 提取第142-143页
     ·同源性分析及聚类分析第143页
     ·生物信息学分析第143页
     ·Gateway 方法载体构建流程第143-145页
     ·农杆菌感受态制备第145页
     ·农杆菌电击转化第145页
   ·结果与分析第145-153页
     ·转录组测序中 FT 和 PI 基因获得第145-146页
     ·FT 和 PI 基因转录组测序和扩增片段测序结果对比第146-147页
     ·FT 基因结构及同源性分析第147-150页
     ·PI 氨基酸序列同源性和聚类分析第150-152页
     ·载体构建检测第152-153页
   ·小结第153-154页
   ·讨论第154-156页
     ·普通油茶花发育分子调控第154页
     ·目的基因选择第154-155页
     ·遗传转化体系构建第155-156页
第八章 普通油茶体胚再生体系初步建立第156-176页
   ·材料与方法第157-159页
     ·试验材料与试剂第157页
     ·采样地点和时间第157页
     ·试验设计第157-158页
     ·数据处理第158-159页
   ·结果与分析第159-172页
     ·不同 pH 对普通油茶幼胚愈伤组织诱导影响第159页
     ·不同培养基与激素配比对幼胚愈伤组织诱导影响第159-161页
     ·2.4-D、KT 与添加物配比对幼胚愈伤组织诱导影响第161-163页
     ·2.4-D、KT、TDZ 和添加物配比对幼胚愈伤组织诱导影响第163-164页
     ·四种激素配比试验对幼胚愈伤组织诱导影响第164-166页
     ·六种激素试验配比对愈伤组织诱导影响第166-167页
     ·愈伤组织继代培养与植株的再生第167-169页
     ·不同类型外植体和愈伤组织特点第169-172页
   ·小结第172-173页
   ·讨论第173-176页
     ·培养基第173-174页
     ·植物激素第174-175页
     ·外植体类型第175页
     ·添加物第175-176页
第九章 普通油茶体胚再生体系优化及外植体的发育特性第176-189页
   ·试验材料与方法第176-178页
     ·试验材料及采样方法第176页
     ·试验设计第176-177页
     ·调查及测定指标第177页
     ·数据分析第177-178页
   ·结果与分析第178-185页
     ·合子胚果形指标变化第178页
     ·合子胚生理指标变化第178-180页
     ·长林 53 号油茶体胚诱导第180-183页
     ·体胚萌发及生长培养基优化第183-185页
   ·小结第185-186页
   ·讨论第186-189页
     ·外植体发育状况对体胚诱导影响第186页
     ·外植体中碳氮化合物含量对体胚诱导影响第186-187页
     ·外植体内源激素水平对体胚诱导影响第187页
     ·胚状体萌发及生长的相关影响因素第187-189页
第十章 农杆菌介导 FT 和 PI 基因遗传转化过程条件优化第189-199页
   ·试验材料与方法第189-191页
     ·试验材料第189页
     ·试验仪器和试剂第189页
     ·根癌农杆菌的活化与外植体的侵染第189-190页
     ·试验方法第190-191页
     ·数据分析第191页
   ·结果与分析第191-196页
     ·抗生素筛选第191-192页
     ·在遗传转化过程中不同因素对抗性愈伤组织获得率影响第192-194页
     ·遗传转化过程中不同因素对愈伤组织农杆菌污染影响第194-196页
     ·选择培养及植株再生第196页
   ·小结第196-197页
   ·讨论第197-199页
     ·抗生素筛选第197页
     ·提高转化率第197页
     ·污染控制第197-198页
     ·选择培养及植株再生第198-199页
第十一章 结论与讨论第199-209页
   ·结论第199-205页
     ·普通油茶花芽分化过程春梢生长和生理生化变化第199页
     ·普通油茶花器官形成过程生理生化变化第199-200页
     ·环境因素对普通油茶成花影响第200-201页
     ·普通油茶转录组测序和花发育相关基因表达第201页
     ·花器官形成过程数字表达谱测序和生物信息学分析第201-202页
     ·花发育相关基因分析和植物表达载体构建第202页
     ·普通油茶体胚再生体系初步构建第202-203页
     ·普通油茶体胚再生体系优化第203-204页
     ·农杆菌介导 FT 和 PI 基因遗传转化过程条件优化第204-205页
   ·讨论第205-206页
     ·普通油茶花发育过程的生理生化变化第205页
     ·环境因素对植物成花影响第205-206页
     ·油茶成花发育过程的分子机制及花发育关键基因第206页
     ·普通油茶花发育的分子水平调控第206页
   ·展望第206-209页
参考文献第209-228页
附录第228-231页
在读期间的学术研究第231-232页
致谢第232页

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