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RafX蛋白介导的肺炎链球菌磷壁酸细胞壁连接机制及其毒力机制研究

英汉缩略语名词对照第1-11页
摘要第11-15页
ABSTRACT第15-21页
前言第21-27页
第一部分:RafX 蛋白特点及可能的生物学功能第27-45页
 1 实验材料第27-30页
   ·实验动物第27页
   ·实验菌株第27-28页
   ·主要试剂第28-30页
   ·主要耗材第30页
   ·主要仪器第30页
 2 实验方法第30-36页
   ·rafX 基因组位置分析第30-31页
   ·细菌总 RNA 的提取第31页
   ·RT-PCR第31-32页
   ·目的基因 PCR 扩增第32页
   ·生长曲线第32-33页
   ·细菌形态学改变第33页
   ·脱氧胆酸盐(DOC)敏感性实验第33页
   ·pJWV25-GFP+ R6 肺炎链球菌的构建第33-34页
   ·RafX-GFP 融合蛋白共聚焦荧光分析第34页
   ·rLytR、rLytA 抗血清的制备第34页
   ·Triton X-114 膜蛋白的提取第34-35页
   ·细菌裂解液的制备第35页
   ·Western blotting 分析第35-36页
 3 实验结果第36-43页
   ·rafX 基因第36-38页
   ·rafX-gtfA 共转录第38页
   ·RafX 蛋白功能生物信息学分析第38-39页
   ·rafX 基因缺陷对细菌表型的影响第39-42页
   ·RafX 蛋白结构特征和定位第42-43页
 4 讨论第43-45页
第二部分:RafX 参与磷壁酸的胞外连接过程第45-69页
 1 实验材料第46-48页
   ·实验菌株第46页
   ·主要试剂第46-47页
   ·主要溶液配制第47页
   ·实验耗材第47-48页
   ·实验仪器第48页
 2 实验方法第48-56页
   ·2%胆碱洗脱制备磷壁酸第48页
   ·5% SDS 溶液制备磷壁酸第48-49页
   ·溶菌酶和 DOC 水解制备壁磷壁酸第49页
   ·S.mitisΔrafX 缺陷菌构建第49-50页
   ·R6ΔrafX 回补缓症链球菌 SM12261_0467 基因第50-51页
   ·lgt、psr、lytR 基因缺陷菌的构建第51-53页
   ·Tricine SDS-PAGE 分析第53-54页
   ·磷壁酸流式细胞术(FACS)分析第54页
   ·磷壁酸的 ELISA 检测第54页
   ·磷壁酸连接酶功能的生物信息学第54-55页
   ·RafX 功能结构域保守性氨基酸分析第55页
   ·临床菌株 rafX 基因保守性分析第55页
   ·磷壁酸的 SDS-PAGE 和 Western blotting 分析第55-56页
 3 实验结果第56-66页
   ·磷壁酸的分离和鉴定第56-62页
   ·rafX 基因与磷壁酸代谢相关第62-63页
   ·细胞表面磷壁酸分析第63页
   ·rafX 基因保守性分析第63-64页
   ·RafX 蛋白功能的生物信息学研究第64-65页
   ·RafX 蛋白突变体与磷壁酸代谢第65-66页
 4 讨论第66-69页
第三部分:肺炎链球菌磷壁酸分子毒力机制第69-87页
 1 实验材料第69-70页
   ·实验动物第69页
   ·实验菌株第69-70页
   ·细胞株第70页
   ·实验试剂第70页
 2 实验方法第70-73页
   ·细胞实验第70页
   ·表面 CbpA 蛋白流式分析第70-71页
   ·小鼠腹腔毒力实验第71页
   ·定植实验第71页
   ·肺组织病理切片及染色第71-72页
   ·血清生长曲线和全血杀菌实验第72页
   ·中性粒细胞表面杀伤实验第72-73页
   ·细菌抗巨噬细胞杀伤实验第73页
 3 实验结果第73-78页
   ·体外细胞粘附实验第73-75页
   ·体内毒力第75页
   ·定植和侵袭第75-77页
   ·细菌全血中生长第77-78页
   ·抵抗中性粒细胞和巨噬细胞杀伤能力第78页
 4 讨论第78-87页
全文总结第87-88页
参考文献第88-95页
综述第95-106页
 参考文献第102-106页
致谢第106-107页
发表的论文/参加的学术会议第107-108页

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